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植物DNA提取實驗，小白必看！
發布時間：2020-11-26瀏覽次數：1236返回列表
實驗方法原理
這是一種快速簡便提取植物總DNA的方法。先將新鮮的葉片在液氮中研磨，以機械力破碎細胞壁，然后加入十六烷三甲基-溴化銨分離緩沖液，使細胞膜破裂。同時將核酸與植物多糖等雜質分開（十六烷三甲基-溴化銨，簡稱CTAB，是一種陽離子去污劑），再經氯-仿-異-戊醇抽提去除蛋白，即可得到適合于酶切的DNA。
實驗材料 幼嫩的植物材料
試劑、試劑盒 液氮 CTAB抽提緩沖液 NaAC Tris-HCl EDTA 氯-仿 異-戊醇 TE buffer
儀器、耗材 瓷研缽 離心管 離心機
一、實驗試劑及材料
1. 材料：幼嫩的植物材料0.5g左右。
2. 試劑：液氮，CTAB抽提緩沖液：2%CTAB(cetyl trimethyl ammo
二、實驗方法
1. 取0.5 g植物材料，雙蒸水洗凈，并用濾紙吸干。
2. 植物材料剪成1 cm左右碎片，放入預冷的瓷研缽中。
3. 加入液氮速冷，研磨成細粉（越細越好）。
4. 在5 ml離心管中加入抽提緩沖液2.5 mll，60℃保溫1小時。
5. 15 000 rpm，離心10分鐘。上清轉入另一個新的離心管中。
6. 加入等體積氯-仿：異-戊醇（24:1），混勻抽提至水乳膠融狀。
7. 15 000 rpm，離心10分鐘。
8. 上清轉入另一個新的離心管中。
9. 加入2/3倍體積預冷異丙醇，-20℃保溫30 min-1 h，緩緩混勻DNA成絮狀折出。
10. 15 000 rpm，離心10分鐘，棄上清。
11. DNA沉淀用 70％乙醇洗2次。
12. 加入400 ul TE buffer溶解DNA。
注意事項：真核細胞基因組較大，在操作中應注意動作輕柔，且在低溫下進行，以zui大限度地減少機械和化學作用對DNA的剪切，從而獲得相對完整的DNA。
其他
以下幾點可能會有所幫助： 1. 堅持使用2-巰-基乙醇和PVP； 2. 取幼嫩一點的材料； 3. 低溫； 4. 快速； 5. 酚氯-仿抽提離心后， 小心吸取上清液， 求質量而不求數量； 6. 壓軸的一點技巧， 酚氯-仿抽提時盡可能充分混勻。
