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樊克淺談：抗肽抗體的制備實驗
發布時間：2018-08-23瀏覽次數：1346返回列表
提高免疫原性肽的抗血清，是zui簡單的方法，獲得非隔離的蛋白質的抗體，例如，對來自DNA序列信息的推定蛋白質序列。 這種方法也是有用的，當隔離的抗原是困難或費時，或當抗原是一個大的蛋白家族的成員。
實驗步驟：
1. 將10 mg BSA溶于0.5 ml 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液中，置于一個2 ml 的玻璃試管，加50 μl MBS/DMF溶液，于室溫下溫和攪拌30 min。
2. 加樣到PD-10柱子上，上柱前用10 ml 的0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液預平衡柱子。
3. 上樣后每0.6 ml 加I為一組分分部收集洗脫液，監測A280并收集一個蛋白峰。
4. 匯集一個峰的洗脫液于15 ml 的玻璃試管中。
5. 將10 μmol 的肽溶于20 mmol/l EDTA中，終濃度約為1 mg/ml。
6. 將其加到裝有MBS/BSA復合物的玻璃試管中。
7. 于室溫下在，氮氣中振搖4 h，于4℃對3 l PBS透析過夜。
8. 換PBS后繼續透析4 h。
3. 上樣后每0.6 ml 加I為一組分分部收集洗脫液，監測A280并收集一個蛋白峰。
4. 匯集一個峰的洗脫液于15 ml 的玻璃試管中。
5. 將10 μmol 的肽溶于20 mmol/l EDTA中，終濃度約為1 mg/ml。
6. 將其加到裝有MBS/BSA復合物的玻璃試管中。
7. 于室溫下在，氮氣中振搖4 h，于4℃對3 l PBS透析過夜。
8. 換PBS后繼續透析4 h。
9. 將樣品分裝成小份，貯存于-20℃。
