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樊克生物：質(zhì)粒載體的基本特征與分類介紹
發(fā)布時間：2018-07-10瀏覽次數(shù)：1656返回列表
質(zhì)粒載體是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上為適應(yīng)實驗室操作而進行人工構(gòu)建的質(zhì)粒。與天然質(zhì)粒相比，質(zhì)粒載體通常帶有一個或一個以上的選擇性標記基因（如抗生素抗性基因）和一個人工合成的含有多個限制性內(nèi)切酶識別位點的多克隆位點序列，并去掉了大部分非必需序列，使分子量盡可能減少，以便于基因工程操作。
質(zhì)粒（plasmid）是細菌或細胞染色質(zhì)以外的，能復(fù)制的，與細菌或細胞共生的遺傳成分。其特點如下：
是染色質(zhì)外的雙鏈共價閉合環(huán)形DNA（covalently closed circular DNA,cccDNA），可自然形成超螺旋結(jié)構(gòu)，不同質(zhì)粒大小在2-300kb之間，<15kb的小質(zhì)粒比較容易分離純化，>15kb的大質(zhì)粒則不易提取。
質(zhì)粒分為嚴緊型和松弛型復(fù)制。
根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細胞的拷貝數(shù)的多少，可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型：嚴緊型和松弛型。嚴緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴格控制，拷貝數(shù)較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數(shù)比較多，一般有10~200個拷貝，有時可達到700個。
按基因轉(zhuǎn)移性：
分兩類：
（1）傳遞性質(zhì)粒：常為大型、嚴緊型質(zhì)粒；
（2）非傳遞性質(zhì)粒：多為小型、松弛型質(zhì)粒。
按遺傳性狀、產(chǎn)物分類：
（1）抗生素抗性：如氨芐西林、氯霉素抗性；
（2）限制酶-修飾酶（R-M）系統(tǒng)：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但不限制外源DNA；hsd-菌株為限制和甲基化雙缺陷型。
人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體分類：
高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體：
ColE1、pMB1派生質(zhì)粒具有高拷貝數(shù)的特點。適合大量增殖克隆基因，或需要大量表達的基因產(chǎn)物。
低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體：
由 pSC101派生來的載體特點是分子量小的拷貝數(shù)。它有特殊的用途：當有些被克隆的基因的表達產(chǎn)物過多時會嚴重影響寄主菌的正常代謝活動，導(dǎo)致寄主菌的死亡時，就需要低拷貝的載體。
失控的質(zhì)粒載體
這是一類溫度敏感型復(fù)制控制質(zhì)粒。如pBEU1、 pBEU2。
插入失活型克隆載體。載體的克隆位點位于其某一個選擇性標記基因內(nèi)部。如pDF41、pDF42。
正選擇的質(zhì)粒載體
直接選擇轉(zhuǎn)化后的細胞。只有帶有選擇標記基因的轉(zhuǎn)化菌細胞才能在選擇培養(yǎng)基上生長。
