HR0482-250T CCK-8細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
- 產品/服務：HR0482-250T CCK-8細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒
- 型 號：HR0482-250T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
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本產品是應用新型的水溶性四唑鹽2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽快速高靈敏度檢測細胞增殖和細胞毒性的比色檢測產品。...
產品特點：
● 使用方便：僅使用單一試劑；
● 靈敏度高，數據可靠，重現性好，線性范圍更寬；
● 結果穩定：試劑本身穩定性高，實驗結果穩定可靠；
● 無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低；
● 適合于高通量藥物篩選。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 帶有450nm濾光片的酶標儀 ● CO2培養箱 ● 96孔培養板 ● PBS ● 純水 ● 移液器
注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 正式實驗前，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK-8試劑后的培養時間。在之間摸細胞數量。培養時間一般在1-4小時。
● 部分藥物可能對檢測有影響，有影響時需換液后檢測，無影響時直接檢測。用培養基或PBS來配制待檢測藥物，加入CCK-8試劑，測藥物溶液在450nm處的吸光度。如果該吸光度與不含藥物僅加CCK-8試劑的培養基或PBS吸光度差異不大，則可以直接加入CCK-8，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用新鮮培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的100μL培養基和10μL CCK-8進行檢測。
● 如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，或者為了去除其他顏色物質的影響，建議設定600nm(或600nm以上)作為參比波長，以OD450扣除參比波長的OD值即可。
● 接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數量不等，可以每接種幾個孔就混勻一下。培養板周圍一圈孔培養基容易揮發，為了減少誤差，建議培養板的四邊每孔只加培養基，而不作為指標檢測孔。
● 培養時間據細胞種類不同和每孔內細胞數量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養時間或增加細胞數量(～105個細胞/孔)。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難染色。對千懸浮細胞，在培養1-4小時后，可先從培養箱中取出，目察染色程度或用酶標儀測定決定。若染色困難，可將培養板放回培養箱，繼續培養數小時后再確定。染色的最佳時間可定為懸浮細胞的最佳培養時間。對于貼壁細胞，培養時間一般為1-4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度(根據細胞種類而定，需要摸索一下條件)。當時用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1000個/孔(100μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500個/孔(100μL培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK-8溶液。
● 有條件的悄況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加CCK-8試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值度數。
● 若細胞培養時間較長，培養基顏色發生變化或pH發生變化，建議更換新鮮的培養基后再加CCK-8試劑。含有酚紅的培養基可用于本試劑盒做細胞活性的測定，酚紅不會影響檢測。
● 如果不是使用96孔板檢測，CCK-8溶液的用量相應等比例增加即可。
● 本試劑盒可以用于細菌的檢測，不可用于酵母檢測。
● CCK-8試劑加樣量較小時，也可以用培養基稀釋CCK-8試劑后加樣以減小誤差。
● 本試劑無細胞毒性，可以在檢測后進行細胞培養，也可以再進行其他檢測。
● 某些細胞實驗中吸光度值太高，可以減少細胞數量，或者縮短加入CCK-8后的培養時間。
● 如果OD值偏低，可以適當增加細胞數量或延長加入CCK-8后的培養時間。
● 接種細胞時要充分重懸，接種均勻。細胞是否接種均勻對結果影響較大。
● OD值在0.5-2.0之間均可，在1.0左右最佳，小于0.5或大于2.0請調整接種量和培養時間。
使用方法：
細胞活性、細胞增殖-毒性檢測
1、收集細胞，加細胞懸液100μL(約5000-10000個細胞)到96孔板(邊緣孔用無菌水或PBS填充)。每板設對照(加100μL培養基)。
2、置37℃,5% CO2孵育過夜，倒置顯微鏡下觀察。
3、每孔加入10μL待檢測藥物溶液，37℃孵育。
4、每孔加入10μL CCK-8溶液，37℃孵育1-4小時。
5、測定450nm各孔的吸光值，如無450nm濾光片，可以使用450-490nm的濾光片。
6、同時設置空白孔(培養基和CCK-8溶液，無細胞)，對照孔(不加藥培養基和CCK-8溶液，有細胞)，每組設定3-5復孔。
【注】：
● 如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M HCI溶液或者1%w/v SDS溶液，井遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。
● 如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養基，去掉藥物的影晌。當然藥物影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
細胞活力計算：
將各測試孔的OD值減去調零孔OD值或對照孔OD值。各重復孔的OD值取平均數。
細胞活力％=(加藥細胞OD-空白OD/對照細胞OD-空白OD)×100
細胞數量測定
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
2、按比例(例如：1/2比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每孔3-6個復孔。
3、接種后培養基24小時使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標(X軸)，OD值為縱坐標(Y軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(使用 此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8后的培養時間)。
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