HR9098-50T 核糖體蛋白提取試劑盒
- 產品/服務：HR9098-50T 核糖體蛋白提取試劑盒
- 型 號：HR9098-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：873
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。本試劑盒提取的蛋白含高濃度鹽成分，不可直接用于2D電泳，需除鹽后再用于2D電泳。如下游實驗需直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號試劑盒。也可將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（HR0389）。...
使用方法：
細胞核糖體提取：
1、取1-2×107個細胞，在4℃，500-1000×g條件離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；
2、用冷PBS 洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
【注】：
● 在500×g-1000×g條件下離心5分鐘。
3、加入500μL-1mL冷的試劑A，置冰上10分鐘。
4、用Dounce勻漿器勻漿20-30下。
【注】：
● 標準Dounce勻漿器用緊杵5-8次，松杵勻漿15-20次。
● 勻漿杵一個上下來回為一次。
● 普通玻璃勻漿器勻漿一般也不超過30次，勻漿次數并非越多越好。
5、將勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。棄沉淀，收集上清。
6、將上清在4℃，20000×g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。
7、將上清在4℃，100000×g-120000×g力條件下離心60分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果條件允許，可將離心時間延長到2-24小時。可以提高核糖體回收率。
● 液體量較少沒有合適轉頭時，可以將小離心管套入大離心管進行離心；或者用PBS補充液體量后用合適的離心管離心。
8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，混勻。
9、在4℃，100000×g-120000×g力條件下離心60分鐘。
【注】：
● 如果條件允許，可將離心時間延長到2-24小時。可以提高核糖體回收率。
● 液體量較少沒有合適轉頭時，可以將小離心管套入大離心管進行離心；或者用PBS補充液體量后用合適的離心管離心。
10、棄上清，沉淀用50-100μL核糖體提取液C重懸。
11、即得到核糖體蛋白樣品，置冰箱-80℃凍存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
組織核糖體提取：
1、取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。
2、用剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。
【注】：
● 在500×g-1000×g條件下離心5 分鐘。
3、加入500μL-1mL冷的試劑A，置冰上10分鐘。
4、用Dounce勻漿器充分勻漿20-30下，至無明顯固體團塊。然后在4℃，1000×g力條件下離心5分鐘。
【注】：
● 標準Dounce勻漿器用緊杵5-8次，松杵勻漿15-20次。
● 勻漿杵一個上下來回為一次。
● 普通玻璃勻漿器勻漿一般也不超過30次，勻漿次數并非越多越好。
5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管。
6、在4℃，20000×g力條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。
7、將上清在4℃，100000×g-120000×g力條件下離心60分鐘。棄上清，收集沉淀。
【注】：
● 如果條件允許，可將離心時間延長到2-24 小時。可以提高核糖體回收率。
● 液體量較少沒有合適轉頭時，可以將小離心管套入大離心管進行離心；或者用PBS 補充液體量后用合適的離心管離心。
8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，混勻。
9、在4℃，100000×g-120000×g力條件下離心60分鐘。
【注】：
● 如果條件允許，可將離心時間延長到2-24小時。可以提高核糖體回收率。
● 液體量較少沒有合適轉頭時，可以將小離心管套入大離心管進行離心；或者用PBS補充液體量后用合適的離心管離心。
10、棄上清，沉淀用50-100μL核糖體提取液C重懸。
11、即得到核糖體樣品，置冰箱-80℃凍存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
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