HR8272-50T 線粒體膜電位檢測試劑盒(TMRE法)
- 產品/服務：HR8272-50T 線粒體膜電位檢測試劑盒(TMRE法)
- 型 號：HR8272-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：859
TMRE比羅丹明123更快地穿過質膜,并且它們的強熒光允許使用低探針濃度,從而避免聚集。由于它們的熒光對環境相對不敏感,因此TMRE的空間分辨熒光呈現其跨膜分布的無偏分布,TMRE已成功用于高分辨率對于影響活細胞中線粒體膜電位的藥物的高通量篩選測定。 TMRE可以快速通過細胞膜,僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲,并且...
檢測方法：
● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦 ● 熒光酶標儀/光度計
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 離心機 ● PBS或者HBSS(不含酚紅)
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● 始終保持平衡染液中pH值的一致性,因為pH值的變化將影響膜電位。
● 根椐細胞種類、實驗條件不同流式細胞儀設置不同。
● 線粒體膜電位降低,熒光強度減弱。但是結果分析時注意排除熒光淬滅現象,TMRE熒光物質的激發光譜和發射光譜有一部分是重合的,其發射光有一部分(與激發光重合的部分)會被自己重新吸收,而且這種吸收的效益隨著該熒光物質的濃度增加而增強。換而言之,當熒光物質濃度很高的時候其熒光強度和濃度的增加不成正比,此時注意檢測結果的分析。采用JC-1法可以減少熒光淬滅的影響。
使用方法：
染色工作液的配制：
根據樣本數量,用37℃培養箱預熱染料稀釋液試劑B將TMRE熒光染料10倍稀釋。再用HBSS或相應的無血清培養基或其他緩沖液將探針TMRE進行40-200倍稀釋,配制成染色工作液。
【注】：
● 也可不用本試劑盒中的試劑B,直接用HBSS等緩沖液或相應的無血清培養基稀釋TMRE染料至所需濃度。
● 開始實驗前,使用HBSS緩沖液或無血清培養基稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度,建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度400-2000倍稀釋,1000-2000倍適合大多數細胞樣本。
● 建議收到產品后,根據單次使用量,對母液進行小量分裝,每次使用一管,試劑-20℃避光凍存,一年穩定。
● 工作液現配現用。
● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性,建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
● 若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育,熒光信號會衰減。
懸浮細胞：
1、收集樣本細胞以及陰性、陽性對照細胞。
2、用PBS洗滌細胞兩次。離心收集細胞。
【注】：
● 300×g-500×g,2-8℃,離心時間5分鐘收集細胞。
3、用500μL TMRE染色工作液將細胞重懸,細胞密度約5-10×105個/mL。37℃,5% CO2的培養箱中孵育15分鐘。
4、常溫離心收集細胞。用PBS洗滌細胞2次。
【注】：
● 300×g-500×g,離心時間5分鐘收集細胞。
5、用 500μL預熱的1×染色緩沖液將細胞重懸。
6、用流式細胞儀/熒光酶標儀/分光光度計檢測分析結果,或者用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察結果。
貼壁細胞：
對于貼壁細胞,可以先收集細胞,重懸后參考懸浮細胞的檢測方法。也可以直接原位染色后檢測。
純化線粒體：
1、把配制好的TMRE染色工作液再用TMRE稀釋液稀釋5倍。
2、0.9mL 5倍稀釋的TMRE染色工作液中加入0.1mL總蛋白量為10～100μg的純化的線粒體。
3、結果檢測。
組織樣本：
組織樣本可以用玻璃勻漿器勻漿成單細胞懸液后按照細胞樣本的方法檢測。也可以用其他細胞懸液制備的試劑盒處理組織后檢測。
結果分析：
檢測時可以把激發光設置為549nm,發射光設置為574nm。
線粒體膜電位降低,熒光強度減弱。
用流式細胞儀檢測細胞線粒體膜電位的情況。
也可以用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察；用熒光分光光度計或熒光酶標儀檢測。
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