HR8312-500T CFSE/7-AAD雙染細胞毒性檢測試劑盒
- 產品/服務：HR8312-500T CFSE/7-AAD雙染細胞毒性檢測試劑盒
- 型 號：HR8312-500T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-01
- 有效期至：長期有效
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CFSE/7-AAD雙染細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞熒光染料CFSE(CFDA-SE)和7-AAD對細胞進行染色，利用CFSE標記靶細胞，7-AAD標記死的靶細胞來區分不同的細胞，活的靶細胞成綠色，死的靶細胞成紅色和綠色，從而檢測細胞毒性作用。根據不同的實驗方案設計，可以用來檢測化合物的細胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細胞或NK 細胞...
檢測方法：
● 熒光顯微鏡 ● 流式細胞儀 ● 激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備試劑和儀器:
● 流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 離心機 ● CO2培養箱 ● PBS或者HBSS（不含酚紅） ● 熒光專用黑色96孔板
使用方法：
細胞CFSE染色：
1.根據需要檢測的細胞樣品數，用HBSS將CFSE母液200～4000倍稀釋，配制成CFSE染色工作液。不同的細胞需要根據預實驗結果確定最佳染色濃度。如果熒光強度弱，可以適當提高CFSE的終濃度。如果背景太高，可以適當降低CFSE的終濃度，請摸索條件找到最佳濃度。
【注】：
● 也可以用HBSS等緩沖液或相應的無血清培養基稀釋染料母液至所需濃度。
● 開始實驗前，使用HBSS緩沖液或培養基稀釋CFSE到需要的工作濃度。工作濃度為根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，一般染色終濃度200～4000倍稀釋。
● 一般起始濃度按500～1000倍稀釋即可。
● 為了降低過度加載染料導致的潛在背景和細胞毒性，在不影響實驗結果的前提下應盡可能低濃度染色。
● 工作液現配現用。
2.將培養好的待測靶細胞消化后收集，用PBS洗滌2次。
【注】：
● 400×g離心5分鐘。
3.將待測細胞用染色工作液重懸，至細胞濃度大約107/ml。
4.在37℃培養箱中避光孵育15～30分鐘。
5.加10倍體積的含血清培養基，400×g離心5分鐘。
6.離心后去上清，收集細胞，用HBSS或無血清培養基洗滌細胞1～2次，最后加入培養基重懸細胞。
7.在37℃培養箱中孵育20～30分鐘。
細胞模型制備：
1.收集待檢測的靶細胞。
2.進行相應的毒性藥物處理或者效應細胞處理。
【注】：
● 效應細胞和靶細胞比例根據需要自行設定。常見比例如6.25：1；12.5：1；25：1等。
● 活的靶細胞成綠色；死的靶細胞成紅色和綠色；死的效應細胞成紅色，活的效應細胞成無色。
細胞檢測：
1.收集制備好的毒性處理過的細胞模型。
2.用200μL HBSS重懸細胞，加入1μL 7-AAD染色液，混勻。
【注】：
● 微量的染色液注意有效的加入細胞懸液并充分混勻。
● 可以根據預實驗確定的染色液濃度，直接用7-AAD和HBSS緩沖液配制成染色工作液，并用染色工作液重懸細胞。
3.在2～8℃避光孵育10～60分鐘。
4.在400×g離心5分鐘收集細胞。
5.用500μL HBSS或PBS重懸細胞。
6.取500μL細胞懸液，用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。
7.根據流式結果計算死亡細胞百分率。被殺傷死亡的靶細胞被7-AAD染上會出現在CFSE+7-AAD+區域，未殺傷的在CFSE+7-AAD-區域，得出被殺傷的靶細胞的比例。用這個比例再計算毒性。
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