WE0128 cDNA鏈合成試劑盒
- 產品/服務：WE0128 cDNA鏈合成試劑盒
- 型 號：WE0128
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-21
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：903
產品簡介
cDNA鏈合成試劑盒是高品質的核酸擴增(PCR)產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科研試驗，cDNA鏈合成試劑盒是我司眾多優質核酸擴增(PCR)之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括cDNA鏈合成試劑盒(微量樣本)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：cDNA鏈合成試劑盒(微量樣本)
英文名稱：UltraRT cDNA Synthesis Kit
產品貨號：WE0128
產品規格：25次|100次
本試劑盒是專為兩步法RT-PCR步實驗配制的cDNA鏈合成試劑盒。該試劑盒使用的逆轉錄酶是一種利用大腸桿菌工程菌進行重組與表達的全新逆轉錄酶，去除了RNase H活性并增強了其熱穩定性，可利用低量的總RNA或mRNA合成cDNA鏈，起始樣本量可低至pg級。UltraRT逆轉錄酶與RNA親合能力強，能通讀GC含量高，二級結構復雜的RNA模板，獲得高產量的cDNA。
本試劑盒包含從RNA模板逆轉錄成cDNA鏈所需的所有試劑，含有Super RT逆轉錄酶、反應緩沖液、引物、dNTP等，使用簡單方便。本系統對后續的PCR以及定量PCR試驗兼容性高，適用各種PCR反應的DNA聚合酶。
試劑盒組成：
| 組份 | 25次 | 100次 |
| UltraRT，200 U/μl | 25μl | 100μl |
| 5×UltraRT Buffer | 120μl | 500μl |
| Primer Mix | 60μl | 240μl |
| dNTP Mix，2.5 mM Each | 120μl | 500μl |
| RNase-Free Water | 1ml | 1ml |
產品特點：
1、逆轉錄：與RNA模板親和力高，逆轉錄效率高達90%，可識別pg級別的模板。
2、自由應對復雜模板：即使GC含量高，二級結構復雜的模板，無需高溫變性，也可得到良好結果。
3、使用方便：試劑盒包含除RNA模板外的逆轉錄所需全部試劑。
注意事項：
1、在操作過程中應避免RNase污染，防止RNA降解或實驗中的交叉污染，建議在專門的區域進行RNA操作，使用專門的儀器和耗材，操作人員帶口罩和一次性手套并經常更換手套。
2、實驗盡量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，應使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃處理12小時，并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用，或者將玻璃器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實驗中用到的無菌水應使用0.1%的DEPC處理后進行高壓滅菌。
3、本試劑盒中的所有試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻，盡量避免起泡，并經短暫離心后使用。所涉及的酶類使用后應盡快放回-20℃，避免反復凍融。
4、若起始RNA的量小于50ng，建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：WE0223。
使用方法：
注意：1ng-5μg總RNA可建立20μl反應體系，如果總RNA量大于5μg，請按比例擴大反應體系。
I逆轉錄操作步驟：
1、將RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、UltraRT Buffer、UltraRT和RNase-Free Water溶解并置于冰上備用。
2、根據以下表格配制反應體系，總體積為20μl。
| 試劑 | 20μl反應體系 | 終濃度 |
| dNTP Mix，2.5 mM Each | 4μl | 500μM Each |
| Primer Mix | 2μl | |
| RNA Template | Xμl | 50 pg-5μg |
| 5×UltraRT Buffer | 4μl | 1× |
| UltraRT，200 U/μl | 1μl | |
| RNase-Free Water | up to 20μl |
注意：
a.若起始RNA的量小于50ng，則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：WE0223。
b.Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。可根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議 20μl 反應體系Oligo-dT Primer 50 pmol，或Gene Specific Primer 2pmol。
3、渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
4、42℃孵育30-50分鐘，85℃孵育5分鐘。反應結束后，短暫離心，置于冰上冷卻。
5、逆轉錄產物可直接用于PCR反應和熒光定量PCR反應，或置于-20℃長期保存。
II若逆轉錄效率低，或RNA模板二級結構復雜、GC含量高時，建議采用以下步驟：
1、將RNA模板、Primer Mix、dNTP Mix、UltraRT Buffer、UltraRT和RNase-FreeWater溶解并置于冰上備用。
2、根據以下表格配置反應體系，總體積為15μl 。
| 試劑 | 20μl反應體系 | 終濃度 |
| dNTP Mix，2.5 mM Each | 4μl | 500μM Each |
| Primer Mix | 2μl | |
| RNA Template | Xμl | 50 pg-5μg |
| RNase-Free Water | up to 15μl |
注意： Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。可根據實驗需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer。
3、70℃孵育10分鐘，迅速冰浴2分鐘。
4、短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、繼續向以上反應液中加入以下試劑：
| 試劑 | 20μl反應體系 | 終濃度 |
| 5×UltraRT Buffer | 4μl | 1× |
| UltraRT，200 U/μl | 1μl |
注意：若起始RNA的量小于50ng，則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供，如需要可單獨向本公司訂購，貨號：WE0223。
6、42℃孵育30-50分鐘，85℃孵育5分鐘。
7、反應結束后，短暫離心，置于冰上冷卻。
8、逆轉錄產物可直接用于PCR反應和熒光定量PCR反應，或置于-20℃長期保存。
儲存條件：-20℃，避免反復凍融。
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儲存條件：低溫運輸和-20℃保存，有效期一年。
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本品中已經含有所有的通用組分，用戶只需自備引物、模板DNA和水即可進行PCR擴增。大大簡化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過程中可能導致的污染，使PCR的重復性更好。可以擴增出長達8kb的片段，但通常更適合用于擴增2kb以下的DNA片段。
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本產品穩定性高，經測試，反復凍融15次后對PCR的擴增效果無顯著影響。反復凍融15次前后，使用不同引物擴增100-1500bp間不同長度目的片段的效果如下圖所示。
本產品反復凍融15次前后擴增不同長度產物的效果圖。A. 反復凍融前本產品進行PCR的擴增結果。B.反復凍融15次后的本產品進行PCR的擴增結果。除本產品是否反復凍融15次外，A和B的反應體系完全相同，電泳的上樣量也相同。
儲存條件：-20℃，有效期一年。
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