RFT168 T4連接酶
- 產品/服務：RFT168 T4連接酶
- 型 號：RFT168
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-19
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：980
產品簡介
T4連接酶由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，T4連接酶是我司眾多優質克隆與表達之一，質量堪比同類進口產品，價格非常優惠，目前正熱烈促銷中，恭候您的咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括T4連接酶在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：T4連接酶
英文名稱：T4 DNA ligase
產品貨號：RFT168
產品規格：100U
本T4 DNA Ligase是從表達T4 DNA Ligase 基因的大腸桿菌經誘導表達后分離純化而來的，催化相鄰DNA鏈的5’磷酸基團和3’羥基基團以磷酸二酯鍵結合反應。該酶可催化平末端或粘性末端DNA之間的連接，還可修復雙鏈DNA、RNA、DNA/RNA雜交雙鏈中的單鏈切口。本品可應用于DNA插入片段和載體DNA的粘性末端和平末端的連接，以及線性DNA的自身環化。
產品組分：
T4 DNA ligase (5U/μl)————————100 U (20μl)
10×T4 DNA Ligation Buffer——————0.2 ml
50%PEG Solution————————————0.15 ml
活性定義：此酶的活力單位為Weiss Unit。1個Weiss Unit相當于約200個粘性末端連接單位(cohesive-end ligation unit, CEU)。1個CEU單位定義為在20μl的連接反應體系中，在16℃30分鐘內，能使50%的經HindIII消化的λDNA片段連接所需的酶量。
注意事項：
1、T4 DNA Ligase的zuì終用量不要超過推薦的用量，否則影響連接效率。
2、PEG可以大提高平末端的連接效率，我們推薦加入終濃度為5% PEG Solution以提高平末端的連接效率。
3、為了提高轉化效率，轉化時建議所加入連接產物的量不要超過感受態細胞體積的10%。
4、由于T4 DNA Ligase中含有甘油，比較粘稠容易掛壁，建議使用前短暫離心將液體收集到管底，取樣時槍頭盡量不要深入液面太深以免粘在槍頭上造成損失。
儲存條件：-20℃。
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名稱：大腸桿菌JM110化學感受態細胞
貨號：BTN130511
規格：10*100μl
本產品是采用大腸桿菌JM110菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測本產品，轉化效率可達106。本產品為dam-，dcm-的菌株，排除dam，dcm甲基化的影響。
菌株基因型為：dam dcm supE44 hsdR17 thi leu rpsLlacY galK galT ara tonAthrtscΔ(lac-proAB)F-[traD36 proAB+ lacIq cZΔM15]
儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等。
使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μL，根據實際情況分裝使用。
以下實驗以50μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。
注意事項：
1. 涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。
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