Y15017 大孔樹脂NKA-9
- 產品/服務：Y15017 大孔樹脂NKA-9
- 型 號：Y15017
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-29
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：935
產品簡介
北京百奧萊博供應的大孔樹脂NKA-9用于科學研究，我公司的大孔樹脂NKA-9品質上佳，經過多年的開發(fā)生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括大孔樹脂NKA-9在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產品名稱：大孔樹脂NKA-9
產品貨號：Y15017
產品規(guī)格：250g
儲存條件：RT
外觀：顆粒
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pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞毫摩爾級的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對GST及其融合蛋白的純化效率很高。可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結合GST融合蛋白。樹脂用3mol/L NaCl的緩沖液再生。谷胱甘肽瓊脂糖對GST融合蛋白的結合能力很強（每毫升柱床體積的樹脂能結合8毫克融合蛋白）。
技術參數：
粒度：45～165μm
流速：75cm/h
工作PH：pH4.0～10.0
耐壓：0.3Mpa
載量：＞10mg谷胱甘肽S-轉移酶
使用說明：
一、谷胱甘肽樹脂的處理：
1．輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
2．取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿）。
3．4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
4．在樹脂中加入10倍柱床體積預冷的PBS，顛倒數次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
5．每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
二、制備細胞抽提物：
6．每100毫升培養(yǎng)物的細胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
7．加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
8．用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強行注入黏稠的細胞裂解物中，劇烈振動數次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動溫育10分鐘，4℃ 3000g離心30分鐘，去除不溶性細胞碎片，上清轉移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
三、純化融合蛋白：
9．細胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每100毫升細菌培養(yǎng)物加2mL樹脂，于室溫輕搖30min。
10．混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
11．沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數次混勻，洗去未與樹脂結合的蛋白。
12．4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
13．重復步驟11和12兩次。
14．結合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動10min，洗脫樹脂上結合的蛋白。
16．4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
17．重復步驟a和b兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在結合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據融合蛋白中的位點選擇），每mL樹脂加入50單位溶于1mL PBS的蛋白酶。顛倒離心管數次混勻，室溫下振蕩2～16小時。用小規(guī)模實驗確定時間。
19．4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質組成。
試劑配制：
谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
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