動植物組織RNA穩定液是高品質的RNA提取純化產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要動植物組織RNA穩定液等RNA提取純化產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括動植物組織RNA穩定液在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：動植物組織RNA穩定液
英文名稱：Tissue Stabilizer
產品貨號：SY0267
產品規格：100ml

RNA酶廣泛存在環境中，很容易降解新鮮采取的動植物組織、血液、體液等樣本中的RNA，從而使得研究人員在收集完新鮮樣本需要做液氮速凍，或者立即進行RNA的純化，給研究人員的戶外工作帶來很多不便。

動植物組織穩定液（Tissue Stabilizer）是專門開發用于穩定并保護采集樣本內RNA的完整性，一種溶液，可迅速滲入組織，滅活內源RNase。具有以下特點：

1）操作其簡便：只需要將新鮮組織切成合適大?。ā?.5 cm）的組織塊，浸入5~10倍體積的本品中即可。2）穩定周期長：經本品浸漬的組織/細胞可在37℃保存1天，室溫保存1周，4℃保存4周，-20℃/-80℃長期保存。3）下游兼容性廣：幾乎兼容于所有的RNA分離方法，如Total RNA Extraction Reagent總RNA抽提試劑，以及商業化的幾乎所有RNA抽提試劑盒，包括離心柱抽提法，磁珠純化法等。4）應用性廣：可用于多種動植物組織如腦、心臟、肝臟、胰臟、腎臟、脾臟、睪丸、肌肉、植物的莖葉等的保存，還可用于酵母、組織培養細胞等。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）經本品穩定液處理的樣本還可做DNA的提取，甚至蛋白質的提取，但由于本品會變性蛋白質，因此不適合做天然蛋白的提取。
3）本本品穩定液室溫保存過程中可能會產生一些沉淀，只需要在使用前放到37℃溫育片刻，并搖晃使其重溶即可。
4）本本品穩定液僅適用于新鮮組織，不可用于冰凍組織。若需要保護冰凍組織內RNA的穩定性，可使用我司的本品-ICE冰凍動植物組織RNA穩定-過渡溶液，即可在將冰凍組織恢復為勻漿用的組織狀態，并進行RNA抽提的過程中，維持RNA的穩定性。

操作流程

1. 樣品處理：
A. 動物組織：本品穩定液不會破壞動物組織結構的完整性，因此，已經浸入本品的組織平衡一段時間后，可從溶液中取出，切成更小的組織塊（≤0.5 cm大小），再重新放回本品穩定液中。另外，某些動物組織如骨頭具有比較弱的液體滲透性，不適合用本品進行RNA保護。
使用：將組織切成合適的大小塊（≤0.5 cm大小）后，加入5倍體積的本品穩定液。
B. 植物組織：植物組織天生具有的屏障如葉子表面的蠟層可阻礙本品穩定液的滲透，往往需要破壞這些屏障層從而允許溶液的浸透。對于許多柔軟的植物組織如嫩葉，嫩莖等，本品可直接滲透且達到理想的RNA保護效果。
使用：將組織切成合適的大小塊（≤0.5 cm大?。┖螅尤?倍體積的本品穩定液。
C. 組培細胞、白細胞：按照標準實驗操作方法收集細胞（用PBS清洗1-2次）。之后往細胞內加入5～10倍體積的本品穩定液。
D. 酵母：收集大約108個細胞 (12,000 g，2 min)，棄上清。加入0.5～1 ml的本品穩定液。長期保存時應將酵母細胞置于本品穩定液中，4℃放置1小時。然后離心收集細胞 (12,000 g，5 min)，棄上清，再置于-80℃保存。

2. 樣品保存：
A. -80℃保存：對于歸檔的樣本建議-80℃保存，且效果zuì佳，樣本可長期保存，-80℃條件下本品溶液也會結凍。
先需要讓樣本4℃浸透過夜，然后再轉移到-80℃。如果中間需要做樣本的融化，建議取出4℃浸透過夜的組織或者離心收集細胞，然后再凍存在-80℃。之后，樣本可直接放在室溫融化，之后重新凍上，不會造成RNA量的嚴重損失或者RNA完整性的明顯破壞。
B. -20℃保存：也適用于歸檔樣本的保存。樣本不會在-20℃凍住，但可能會形成結晶。不會對后續RNA分離造成影響，樣本可長期保存。
先需要讓樣本4℃浸透過夜，然后再轉移到-20℃。之后，樣本可直接放在室溫融化。重新凍上后不會造成RNA量的損失或者RNA完整性的破壞。
C. 4℃保存：大部分樣品放到本品溶液中，穩定保存1個月，不會有明顯的RNA降解發生。
D. 室溫（25℃）保存：建議低溫環境保存。若條件不允許，請將本品穩定液于冰上冷卻幾個小時，然后將樣品浸入此溶液中，室溫穩定保存1周，不會有明顯的RNA降解發生。
E. 37℃保存：純化的RNA樣本于37℃孵育24h，結構依然完整。

3. RNA提取：
注意：RNase失活的過程是可逆的，在樣本使用前不要清洗掉本品穩定液。
A． 組織樣本：直接用滅菌鑷子從本品穩定液中取出組織塊，然后用干凈的吸水紙吸掉表面的液體。之后立即置于裂解液中勻漿。
B． 細胞樣本：由于本品穩定液密度較大，此時需要使用大于普通介質的離心力。一般來說，保存在本品穩定液中的細胞能承受更高的轉速，并維持細胞的完整性。大部分細胞能夠承受離心速度 (5,000 g，5 min)，收集細胞沉淀。注意：由于不同細胞承受離心力會有差異，建議先用少量的細胞進行離心速度承受性的測試。
C．之后進行后續的RNA抽提，兼容各種常見的RNA抽提試劑，以及商業化的RNA抽提試劑盒。

根據您的關注的動植物組織RNA穩定液，您可能還對以下產品有需求：



名稱：水樣病毒沉淀劑
貨號：BTN101118
規格：10次

名稱：細菌RNA提取試劑盒
貨號：BTN51102
規格：100次
本試劑盒是在動物RNA提取試劑盒基礎上根據細菌提取的具體情況改良而得。它基于異硫氰酸胍/酚/氯fǎng提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各種常見的革氏陰性細菌。如果需要提革氏陽性細菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以選擇真菌RNA提取試劑盒。

試劑盒特點：
1. 操作簡單快速，只要十分鐘左右,可以全在室溫下進行。
2. 所得 RNA 質量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 靈敏度高，可以從一個菌落中提取到普通電泳能夠檢測到的總 RNA。
4. 高于進口同類產品。

試劑盒組成：

成分	規格
細菌RNA提取試劑	100ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料離心管中離心收集0.2-1.5mL 新鮮細菌(注意:由于細菌RNA 半衰期十分短，所以，必須使用zuì新鮮細菌)，吸盡液體培養基，加入1mL細菌RNA提取試劑盒并用槍充分吹打，確保細菌全部裂解，沒有塊狀物。
 如果使用菌落，則用接種環小心將其轉移到裝有1mL細菌RNA提取試劑盒的1.5 m塑料離心管中，用移液槍吹打均勻。在細菌數較少時，建議使 用助沉劑 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL 氯fǎng，在振蕩器上充分振蕩混均 30秒(必須將管底的液體振蕩起來，否則不能有效將DNA 打斷和去除蛋白質)。
3. 12000～15000g室溫離心3分鐘。上清液無色，下層液呈籃色，中間為蛋白質。小心將上清液轉移到另一干凈 1.5ml塑料離心管中，上清液體積約為0.6mL。為避免觸及中間層的DNA和蛋白質，建議分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。當細菌數量較少時，中間層十分松散，上清時很容易吸到下層有機相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等體積的異丙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
5. 12000～15000室溫離心 3-10分鐘，RNA 將在管底側面形成沉淀。
6.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
7.在離心管中加入1mL 75%乙醇，振蕩器上振蕩混均 30秒。
8. 12000～15000g室溫離心 1分鐘。
9.小心吸棄上清液，注意不要吸棄 RNA沉淀。
10. 重復第 8 到第 10 步一次。
11. 短暫快速離心，用移液槍小心吸棄殘留液(約50μl)。
12. 短暫放 1-2分鐘后加入適量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃長期保存。
13. RNA 完整性的電泳檢測：
 如果需要做 Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是簡單檢測，可以使用TAE或百奧萊博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 兩用快速電泳液，但文獻報道必須使用變性上樣液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上樣液不含變性劑，也沒經過去 RNase處理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE進行RNA電泳，因為TBE 所含硼酸是研究多糖的經典方法----硼酸絡合法中的關鍵成分，硼酸通過與RNA 核糖中的羥基發生絡合反應，形成RNA分子內或RNA分子間的絡合復合物，使同樣長度的RNA 具有不同的泳動速度，電泳條帶彌散，同時有大的RNA 絡合復合物遲留在加樣孔中(一般會誤以為是基因組DNA污染)。RNA分子內或RNA分子間的絡合物的形成的多少和比例又與硼酸與RNA的數量比例有關，而RNA樣品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也會參與此反應，使硼酸對RNA電泳的影響更復雜，所以TBE 對RNA電泳的影響沒有規律性和重復性。有的樣品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
 由于細菌細胞中70-80%的RNA為rRNA，后者又由23S(約3700nt)，16S(約1700nt)和5S(約100nt)三種組成，所以變性膠電泳后應該在UV下看見三條清晰的rRNA帶。由于核酸長度與結合 EB的數量成正比(當然還與RNA的二級結構有關，雙鏈部分結合能力比單鏈部分強)，所以23S rRNA條帶的熒光強度一般比16S rRNA條帶的熒光強度強2倍。如果這兩條rRNA 帶不清晰或比例小于此范圍則表示 RNA 有降解(因為大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA產量產率測定：
 將5-10μl RNA 溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA濃度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，進而計算出 RNA的產量和產率。注意不要將RNA 稀釋在 DEPC 水中檢測 OD260和OD280，否則光吸收比在 TE中測得的低 10%-15%，因為核酸光吸收跟溶液 pH相關，而 DEPC 水中的DEPC高壓分解后產生的CO2與水反應生成碳酸，使溶液 pH降低進而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 純度測定：
 無污染的總 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之間(具體數值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之間，如果低于或高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質或多糖的污染，但一般不影響 RT-PCR等反應。蛋白質污染可以通過酚/氯fǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分別用百奧萊博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑難解答：
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA嗎？
A：不是。用 TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳 RNA時容易產生此現象，百奧萊博初步研究發現大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA 通過堿基互補或通過硼酸絡合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復合物，加 RNase處理后，這些紅色熒光物一般會消失。為避免此現象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。使用百奧萊博優化的上樣/變性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非變性膠上電泳時也有較好分辨率。使用非變性膠時，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因為TBE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認和去處除污染的基因組 DNA？
A：如果懷疑有 DNA污染，可以用 RNase處理 RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組 DNA污染。進一步確認可以使用 PCR擴增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除劑DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴格按照廠家提供的使用說明書進行操作。

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BTN71207	RNA洗脫液	10mL
WE0192	超純RNA提取試劑盒	50次|200次
WE0404	RNA樣本保存液	100ml|500ml

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