我公司致力于為客戶提供高純度、低成本的活性重組蛋白，包括預染彩虹蛋白Marker在內的各類受體、細胞因子、生長因子、轉錄因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特別提示：包括預染彩虹蛋白Marker(10～170kD)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：預染彩虹蛋白Marker(10～170kD)
產品貨號：JN0173
產品規格：50μl

  本產品由10條預染藍色，橙色和綠色的蛋白組成，分子量從小到大分別為10kD，15kD，25kD，35kD，40kD，55kD，70kD，100kD，130kD，170Kd。 其中70kD蛋白為橙色，10kD蛋白為綠色，其余為藍色。本產品可以作為標準蛋白分子量參照,適用于蛋白SDS-PAGE電泳和western blot.

使用建議：本產品無需處理，可直接使用于PAGE電泳及WesternBlot實驗。薄膠 (0.75-1mm)，2μl/次；厚膠(1.5mm)，3μl/次。

緩沖液配方：50mM Tris-H3PO4 (pH 7.5 at 25℃), 1mM EDTA, 2% SDS, 10mM DTT,1mM NaN3 and 25% glycerol.

儲存條件：-20℃，避免反復凍融，有效期12個月。

根據您的關注的預染彩虹蛋白Marker(10～170kD)，您可能還對以下產品有需求：



名稱：預混型BCIP/NBT溶液
貨號：BTN100214
規格：250mL
本產品是在BCIP/NBT底物顯色試劑盒(BTN81224)的基礎改良而得的升級產品。

產品特點：
1．含有BCIP和NBT 兩種成分的混合液，不需混合和稀釋，直接使用，十分方便。
2．在堿性磷酸酶存在時形成暗紫色沉淀，具有和其他AP底物(包括分開提供的BCIP/NBT溶液)一樣的靈敏度。
3．穩定，使用精心優化的溶劑，在低溫條件下可以保存一年。
4．可用于Western Blot。

儲存條件：常溫運輸和保存(避光)，有效期一年。

自備試劑：Western印跡膜洗膜液(BTN81211)或TBST緩沖液。

使用方法：
1．按常規方法進行Western 印跡膜雜交，直到跟二抗-AP 復合物保溫這步結束。
2．用Western 印跡膜洗膜液洗印跡膜5次，每次至少1分鐘。注意：可以用TBST緩沖液代替Western 印跡膜洗膜液。
3．用水迅速沖洗一次。
4．將印跡膜轉移到本產品中(每cm2印跡膜需要0.1mL本產品)，室溫平緩搖晃5-30分鐘顯色。37℃可加速反應。
5．細心觀察蛋白條帶的顏色變化，顯色到滿意程度后(一般需要20分鐘，具體跟蛋白濃度密切相關)迅速將印跡膜轉移到盛有超純水的托盤中搖晃，終止顯色反應。數分鐘后需要換水，共三次。
6．用吸水紙吸干膜上的水分，照相或掃描處理后避光干燥保存印跡膜。

名稱：SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(6X)
貨號：YT052
規格：2ml
本品是一種經過改良的以溴酚藍為染料，6倍濃縮的蛋白上樣緩沖液，可以用于常規的SDS-PAGE蛋白樣品的上樣。

注意事項：
1. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(6X)中含少量DTT，有輕微刺激性氣味，但不含劇毒的巰基乙醇。
2. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(6X)必須完全溶解后再使用。

儲存條件：-20℃，有效期一年。


名稱：His標簽蛋白純化試劑盒(包涵體蛋白)
貨號：WE0266
規格：5ml
  該鎳柱純化系統對6×His-tag蛋白具有顯著特異吸附能力，能夠一步純化帶有6個組氨酸親和標簽的蛋白。該系統具有4個Ni2+螯合位點，較只有3個螯合位點的Ni-IDA結合Ni2+更為牢固，有效防止純化過程中Ni2+脫落且增強對His標簽蛋白的結合能力，提高純化效率。較高的基團密度，大大提高了蛋白載量。該系統在天然或變性條件下，對來源于各種表達系統(如桿狀病毒，哺乳細胞，酵母以及細菌)中的His標簽蛋白，均有很好的純化效果。本產品已螯合鎳離子，可直接用于包涵體蛋白的純化，使用方便，快捷。

鎳柱參數：
支持物：CL-6B瓊脂糖凝膠
載量：20-30 mg His標簽蛋白/ml填料
粒徑：50-160μM

試劑盒組成：

組份	5ml
Ni-Agarose Resin	5ml
Bacterial Protein Extraction Reagent	65ml
Urea	365 g
1 M Tris-HCl(pH7.9)	15ml
1 M Imidazole	65ml
3 M NaCl	120ml
Protease Inhibitor Cocktail	700μl
吸附柱(12ml)	1套

保存條件：Protease Inhibitor Cocktail，-20℃；Ni-Agarose Resin，2～8℃，避免冷凍；其它組分，2～8℃

注意事項：
1、在純化之前采用電泳檢測蛋白的可溶性，本試劑盒只適合于包涵體蛋白的純化，如需純化可溶性蛋白，請選擇我公司的可溶性蛋白純化試劑盒，貨號為WE0267。
2、緩沖液中不建議使用 β-巰基乙醇、DTT和EDTA。
3、整個純化過程中切忌凝膠脫水變干。
4、為提高純化效率，先確定Binding Buffer和Elution Buffer中Imidazole(咪唑)的zuì佳使用濃度。必要時可以使用線性或梯度濃度的Imidazole(咪唑)(10-500 mM)洗脫蛋白，并通過SDS-PAGE或Western Blotting來檢測目的蛋白的純度。
5、請使用高純度的試劑配制緩沖液，并通過0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。為避免柱子被堵塞，建議將裂解液進行離心，或者使用0.22μM或者0.45μM過濾器過濾。
6、柱再生時，保證每步洗完后都要用足夠的去離子水沖洗至中性。
7、如果有些蛋白采用尿素的溶解效果不好，可以采用鹽酸胍進行溶解。

使用方法：

I 緩沖液的準備
包涵體蛋白純化緩沖液配方：

組份	Tris-HCl(pH7.9)	Imidazole	NaCl	Urea
Binding Buffer	20 mM	5 mM	0.5 M	8 M
Elution Buffer	20 mM	500 mM	0.5 M	8 M

II 組裝層析柱
1、將Ni-Agarose Resin填料混勻后加入層析柱，室溫靜置10分鐘，待凝膠與溶液分層后，把底部的出液口打開，讓乙醇通過重力作用緩慢流出。。
注意：
1)填料的上層是乙醇保護層，將填料和乙醇一起混勻，以每ml填料純化20-30mg His標簽蛋白計算，取需要的填料與乙醇的混合液加入層析柱。
2)如果乙醇不流出，可以給柱子一個外力，例如用大拇指對柱口輕輕按壓一下，迫使乙醇流出。
3)本實驗都是通過重力作用使溶液流出。
2．向裝填好的柱中加入5倍柱體積的去離子水將乙醇沖洗干凈后，再用8倍柱體積的Binding Buffer平衡柱子，平衡結束后即可上樣。
注意：柱體積指的是填料的體積。

III 包涵體蛋白的純化
1、收集菌體后，每100 mg菌體(濕重)加入2ml細菌裂解液(每1ml細菌裂解液中請預先加入10μl 蛋白酶抑制劑混合物)，如有需要可以超聲裂解菌體。
注意：
1)當提取物粘度高或提取蛋白為包涵體時，建議加入DNase I和Lysozyme。每1ml 細菌抽提試劑中加入1μl DNase I(1000U/ml)，2μl Lysozyme(50 mg/ml)，DNase I和Lysozyme可單獨從我公司購買，貨號：Lysozyme(WE0214S)、 DNase I(WE0213S)，如使用其它公司產品，請按照相應說明書操作。
2)超聲過程中保持菌液處于冰浴中，超聲條件依賴于所使用的超聲儀功率，探頭種類，容器的大小形狀，需實驗中自己摸索，應避免連續超聲導致的大量產熱，可分成短時間，多次超聲，通過一定的間隔時間避免溶液過熱。zuì終菌液變清即可。
2、10000×g，4℃離心15分鐘，分離上清和沉淀，并收集沉淀。
3、將沉淀重懸于Binding Buffer中，盡量混勻使包涵體充分溶解。
4、10000×g離心20分鐘，收集上清。
注意：建議將離心后的上清以孔徑為0.22μM或者0.45μM的濾膜過濾。
5、將上清負載上柱，流速為10倍柱體積/小時，收集流穿液。
注意：
1)本試劑盒中附帶有一塊篩板，使用時先將篩板加至填料的上層，再將處理好的上清負載上柱。該篩板可用于雜質較多的蛋白的過濾，防止過多的雜蛋白堵塞柱子，但是篩板放入柱子后不易取出。
2)通過控制加入的上清(菌體裂解液)的速度來控制流速。
6、使用15倍柱體積的Binding Buffer沖洗柱子，洗去雜蛋白。
7、使用適量Elution Buffer洗脫，收集洗脫峰。
注意：通過蛋白監測儀監測，洗脫峰可以分管收集，每1ml收集1管。
8、洗脫后，依次使用5倍柱體積的Binding Buffer，5倍柱體積的去離子水洗滌柱子，再用3倍柱體積的20%乙醇平衡(乙醇要將填料浸沒)，封柱后2～8℃保存。
注意：
1)在純化包涵體蛋白時，所有緩沖液均含有變性劑，可以降低Binding Buffer中的咪唑濃度(比5 mM更低)。洗脫時，若蛋白在較高pH下洗脫失敗，可以選用低pH緩沖液作為洗脫緩沖液(pH6.5，pH5.9或pH4.5)。
2)如果是分段梯度洗脫，zuì大洗脫緩沖液中咪唑濃度未達到500 mM，則使用濃度為500 mM的咪唑進行洗脫10倍柱體積后，再進行第8步的操作。

Ⅳ 柱再生
當填料使用多次后，結合效率會有所下降(表現為流速變慢或填料失去藍綠色)，可以用以下方法再生，提高填料的使用壽命和蛋白質的結合效率。
1、使用2倍柱體積的6 M鹽酸胍沖洗后，使用3倍柱體積的去離子水沖洗。
2、使用1倍柱體積的2% SDS沖洗。
3、依次使用1倍柱體積的25%、50%、75%和5倍柱體積的乙醇沖洗，再依次使用1倍柱體積的75%、50%和25%的乙醇沖洗。
4、使用1倍柱體積的去離子水沖洗。
5、使用5倍柱體積含50 mM EDTA緩沖液(PH8.0)沖洗。
6、使用3倍柱體積去離子水，3倍柱體積20%乙醇沖洗。
7、2～8℃保存。
8、再次使用前，需先使用10倍柱體積去離子水沖洗，然后使用5個柱體積的50 mM NiSO4 再生，3個柱體積的Binding Buffer平衡。

儲存條件：-20℃

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