MQ0060 AGL1農桿菌電轉感受態細胞
- 產品/服務：MQ0060 AGL1農桿菌電轉感受態細胞
- 型 號：MQ0060
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-29
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：972
產品簡介
AGL1農桿菌電轉感受態細胞是高品質的克隆與表達產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，本品質量穩定，價位合理，需要AGL1農桿菌電轉感受態細胞等克隆與表達產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示：包括AGL1農桿菌電轉感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：AGL1農桿菌電轉感受態細胞
英文名稱：AGL1 Electroporation-Competent Cell
產品貨號：MQ0060
產品規格：10×50μl/50×50μl
AGL1菌株為C58，RecA型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif和羧芐青霉素抗性基因carb，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無自身轉運功能的琥珀堿型Ti質粒pTiBo542DT-DNA，此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pTiBo542DT-DNA質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。
pTiBo542DT-DNA型Ti質粒含有篩選標簽：strep，賦予AGL1菌株鏈霉素抗性，適用于水稻、擬南芥、楊樹等植物的轉基因操作，開的AGL1電轉感受態特別適用于大質粒的轉化：經pCAMBIA2301質粒(size:11633bp)檢測轉化效率可達5×104cfu/μg；經pCAMBIA2301-ZH質粒size:40kd)檢測轉化效率可達5×103cfu/μg。
保存條件：-80℃
基因型：
C58 RecA(rif R/carbR)Ti pTiBo542DT-DNA(strepR)Succinamopine
操作說明：
1.0.2cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的農桿菌感受態插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5μg質粒DNA(質粒體積不大于6μl，zuì好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解)，用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200μl槍頭將感受態-質粒混合物快速移到電擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3.啟動電轉儀，設置參數：C=25uF，PC=200ohm，V=2400V(此參數為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作)，將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700μl無抗生素的LB并轉移到感受態空管中，28℃振蕩培養2~3小時。
4.6000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天(當平板只含有50μg/ml kan時，28℃培養48h即可；平板中同時加入50μg/ml kan，20μg/ml rif時，需28℃培養60h；如果使用的平板含有50μg/ml rif則需要28℃培養72-90h)。
注意事項：
1.感受態細胞zuì好在冰上融化。
2.混入質粒時應輕柔操作。
3.轉化高濃度的質粒可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
注意事項：
1.加入質粒時體積不應大于感受態體積的1/10；質粒不純或存在鹽，乙醇等污染，轉化效率急劇下降；若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
2.混入質粒時應輕柔操作。
3.轉化高濃度的質粒可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
4.利福平濃度不應高于25μg/μl，過高的利福平濃度不利于農桿菌生長，會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態計算轉化效率時所用平板只含有50μg/ml kan，若所用平板含有20μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。
5.培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質粒丟失，但鏈霉素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質粒丟失的概率低(可以忽略)。
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