WE0257 RIPA裂解液(中)
- 產(chǎn)品/服務：WE0257 RIPA裂解液(中)
- 型 號：WE0257
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-29
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：863
產(chǎn)品簡介
RIPA裂解液(中)的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品，本制品用于生化實驗研究等領域，本品質(zhì)量穩(wěn)定，價位合理，需要RIPA裂解液(中)等蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的客戶，請到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
產(chǎn)品詳細介紹
特別提示：包括RIPA裂解液(中)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：RIPA裂解液(中)
英文名稱：RIPA Lysis Buffer(Medium)
產(chǎn)品貨號：WE0257
產(chǎn)品規(guī)格：100ml
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細胞快速裂解液，主要用于從動物組織和哺乳動物細胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度可以分為強、中、弱三類，具體特點和差異請參考附表2，可根據(jù)實驗需求選擇相應產(chǎn)品。經(jīng)RIPA裂解液(中)提取的蛋白可應用于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。
RIPA裂解液(中)的主要成分為50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1% NP-40，0.5% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。
注意事項：
1、為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進行蛋白定量，以測定蛋白濃度。產(chǎn)品可單獨向本公司訂購，如:WE0276 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的去垢劑，不能用Bradford法進行蛋白定量。
3、建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨向本公司訂購，如:WE0259 蛋白酶抑制劑混合物，WE0256 磷酸酶抑制劑混合物。
4、若需獲得更高濃度的蛋白，應減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量。
5、對于培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細胞，再參考懸浮細胞蛋白提取步驟操作。
6、對于離心獲得的細胞，若不確定細胞體積，可根據(jù)細胞數(shù)量計算RIPA裂解液的使用量。如5×106個Hela細胞約需加入500μl RIPA裂解液，以此類推。
使用方法：
一、細胞樣品
貼壁細胞蛋白抽提
1、小心傾去貼壁細胞的培養(yǎng)液。
2、可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結(jié)果的物質(zhì)，請先使用預冷的PBS漂洗細胞。
3、加入適量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)，試劑使用量請參考附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細胞。
表1 貼壁細胞RIPA 裂解液使用量推薦表
| 細胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積 | RIPA 裂解液使用量 |
| 100 mm | 500-1000μl |
| 60 mm | 250-500μl |
| 6孔培養(yǎng)板 | 200-400μl /孔 |
| 24孔培養(yǎng)板 | 100-200μl /孔 |
| 96孔培養(yǎng)板 | 50-100μl /孔 |
4、將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進行下一步分析。
懸浮細胞蛋白提取
1、懸浮細胞，2,500×g離心5分鐘，棄去上清。
2、可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結(jié)果的物質(zhì)，請使用PBS漂洗細胞。漂洗后的細胞懸浮液2,500×g離心5分鐘，棄去上清。
3、加入適量RIPA Lysis Buffer(Medium)(使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑)，每5×106細胞加入約200-500μl RIPA Lysis Buffer(Medium)，吹打均勻。
4、冰上放置20分鐘，使細胞充分裂解。
5、14000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進行下一步分析。
二、組織樣品
1、取適當?shù)腞IPA Lysis Buffer(Medium)，在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。
2、稱量實驗組織的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Medium)后將組織剪成細小碎片，用電動勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當減少組織蛋白抽提試劑使用量。
3、冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。
4、14000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。
表2 蛋白裂解液性能、參數(shù)比較
| 目錄號 | WE0258 | WE0257 | ||
| 名稱 | RIPA裂解液(強) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | SDS裂解液 |
| 裂解強度 | 強 | 中 | 溫和 | 強 |
| 有效裂解成分 |
1%Triton X-100， 1%脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS |
1% NP-40， 0.5%脫氧膽酸鈉 , 0.1% SDS |
1% NP-40， 0.25%脫氧膽酸鈉 | 1%SDS |
| 膜蛋白提取 | 很好 | 較好 | 一般 | 很好 |
| 胞漿蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
| 核蛋白提取 | 很好 | 較好 | 較好 | 很好 |
| 主要用途 | WB，IP | WB，IP | WB，IP，CO-IP | WB，CHIP |
儲存條件：2～8℃
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| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
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| BTN110809 | 6mL親和層析柱 | 6mL |
| BTN151201 | 預染蛋白Marker(11～180kD) | 200μL |
| BTN100811 | 質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒 | 10次 |
| YT038 | Western及IP細胞裂解液 | 100ml |
| WE0272 | Ni瓊脂糖凝膠 | 10ml |
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