BTN3190 水飽和酚
- 產品/服務：BTN3190 水飽和酚
- 型 號：BTN3190
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-25
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：969
產品簡介
水飽和酚由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要水飽和酚等RNA提取純化產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示：包括水飽和酚在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：水飽和酚
英文名稱：Water-Saturated Phenol
產品貨號：BTN3190
產品規格：100mL
本品是將重蒸餾酚用水充分飽和而得，pH在7左右。水飽和酚不會再吸收樣品的水分。本產品可以用于配制TRIzol，也直接用于RNA提取。
儲存條件：常溫運輸和保存、避光。有效期一年。
疑難解答：
Q：分子生物學實驗為何需要使用飽和酚？
A： 酚跟水有一定程度的互溶，酚水混合液中水相中一般有8-10%的酚，酚相中一般有12%的水，互溶的比例還跟溫度、鹽離子等相關(比如，65℃時，水和酚徹底互溶，不再分相)。如果使用未飽和的酚處理樣品，則分相后樣品的體積將減少，所以為了避免樣品的丟失，需要使用沒有吸水能力的各種飽和酚。
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規格：100次
本試劑盒是專用于血清(血漿)等液體樣品中提取病毒RNA的純化試劑。本產品回收率高,尤其適合于整合到臨床RT-PCR檢測試劑盒中。且能用于提取其他液體樣品和微量樣品。
產品特點：
1. 回收率達到90%以上，高于大部分基于離心柱的提取方法。
2. 靈敏度高，RT-PCR檢測到的zuì終靈敏度可以達到50-100拷貝/mL(對HIV和HCV)。
3.一管式操作，不使用離心柱，整個操作過程均在室溫下完成。
4. 環保，不需要使用苯酚和氯fǎng等有毒的有機溶液。
5.可放量，如果加上病毒離心富集步驟，每管zuì多可以處理樣品1.5mL。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 30ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：常溫運輸，4℃保存，有效期一年。
使用方法：
一：準備工作
1. 血漿的抗凝劑必須是EDTA或ACD，不能是肝素。使用ACD時由于所加入ACD會增加體積，樣品會被稀釋，得到的病毒滴度會比使用EDTA低15%左右。
2. 用于制備血漿的全血在2-25℃放置的時間不能超過6小時，在此時間內，可以室溫800-1600g離心20分鐘，上清即為血漿。
3. 血漿可以在2-8℃或更低溫度下運輸，可以在室溫放置一天，2-8℃放置5天，-20℃以下長期保存。
4. 血漿zuì好按0.6mL/管的量分裝保存，以避免反復凍融。
5. 實驗前所有試都必須放置在室溫。
6. 實驗當天新鮮配制70%的乙醇。
二：病毒提取操作
1. 標記1.5-2mL螺旋蓋塑料離心管(如Sarstedt CAT#:782.694.006)，為避免污染，建議不要使用壓蓋式塑料離心管。注意設置陽性和陰性對照。
2. 每管(包括正負對照管)中加入0.6mL病毒RNA提取試劑盒溶液(需提前融化)。
3.快速震蕩樣品幾秒，再短暫離心，取0.2mL液體樣品加入到已經裝有0.6mL病毒RNA提取試劑盒溶液的管中。如果病毒需要富集，可以將1.5mL液體樣品在4℃ 24,000 g冷凍離心60分鐘，移棄1.3mL上清后在取用樣品。
4.在正負對照樣品管中分別加正負對照樣品。
5.室溫放置10分鐘。此間可以在每個管上做個標記，以在下步區別向心面和離心面。
6. 振蕩數秒后加入0.7mL室溫異丙醇，旋緊蓋后振蕩30秒混勻，把離心管的向心面對向轉頭的中央，13,000-15000g室溫離心至少15分鐘。
7.小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的RNA沉淀(此時可能看不見)。
8. 加入1.0mL室溫70%乙醇，振蕩數秒后 15000g室溫離心5分鐘。注意：在離心機中放置離心管時將其向心面對向轉頭的中央。
9.小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的RNA沉淀(此時呈膜狀沉淀)。
10. 再短暫離心數秒，用移液器移棄殘留液體(70%乙醇)，否則它會影響后續反應。
11. 加入200μl RNase-free水或百奧萊博的1×液相RNase Scavenger(能滅活殘留的RNase，而RNase-free水無此功能)，用移液槍仔細吹打離心管管底和管壁離心面的膜狀RNA沉淀，溶液將呈混濁狀,含少量不溶物。由于不溶沉淀物中含有RNA，所以不要離心后取上清使用，必須取混合液使用，哪怕很渾濁。
12. 直接取適量用于RT-PCR，如果溶于200μl水,同時樣品使用量不超過RT-PCR體系的1/2，不溶物一般不會影響RT-PCR。剩余樣品可以室溫放置2小時，也可保存于-80℃保存一個月。
疑難解答：
Q：提取液體樣品/病毒核酸(RNA或DNA)為何很難？
A：原因一是量少。病毒顆粒中的RNA或DNA是作為遺傳物質保存，每個病毒zuì多只攜帶幾個拷貝(而一個細胞中有上萬個RNA分子)，同時其長度也十分有限(是細胞基因組的萬分之一以下)，樣品中病毒數往往也不是很多，使得樣品中核酸的量幾乎是微乎其微，十分容易丟失。另外，由于得到的核酸量少，不能使用電泳和測OD檢測，只能通過PCR或RT-PCR檢測，而病毒RNA往往具有穩定的二級結構，進一步增加了鑒定的難度(即不知道是RNA提取的問題還是RT-PCR的問題)。
Q：如何判斷是病毒RNA沒提取出來還是提取出來了但沒有RT-PCR成功？
A：在RT-PCR反應中加陽性和陰性對照。
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