Mag NHS磁珠由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要Mag NHS磁珠等磁珠微球產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...

特別提示：包括Mag NHS磁珠在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Mag NHS磁珠
英文名稱：Mag NHS
產品貨號：CZ018
產品規格：1ml/5ml/50ml

產品簡介：
Mag NHS表面為NHS基團修飾，能夠與帶有伯胺基團的蛋白和其他分子形成穩定的肽鍵，用于親和純化抗體、抗原和其他生物分子。與傳統的羧基、氨基磁珠相比，表面含NHS基團的磁珠無需先采用EDC/NHS或戊二醛進行活化，只需簡單地將含伯氨基的生物配體溶解在試劑盒自帶的Coupling Buffer中，室溫下將蛋白與NHS磁珠混合1～2 h便可將生物配體共價偶聯到磁珠上，具有操作簡單、偶聯條件溫和、生物配體偶聯快速等優點。磁珠偶聯過程必需在不含任何氨基的緩沖溶劑中進行。人工操作時，使用磁性分離架實現磁珠與溶劑分離。也可采用自動化設備操作，自動化操作適合用于多樣品的篩選。
蛋白偶聯操作優化點：
1. 其中磁珠洗滌要嚴格按照說明書采用冷卻的Washing Buffer A快速洗滌，以防磁珠在洗滌過程中NHS基團水解；
2. 蛋白偶聯過程中，先要通過實驗確定合適的 Coupling Buffer(主要包括 Coupling Buffer A、 Coupling Buffer B、50 mM硼酸溶液，pH 8.5、100 mM 磷酸緩沖液，100 mM NaCl，pH 7.4這四種)；
3. 確定合適的Coupling Buffer后，再以此Coupling Buffer為基礎，確定合適的偶聯蛋白濃度，因為蛋白濃度越高，偶聯到磁珠上的蛋白的量會越大(這是由于NHS基團跟蛋白偶聯和NHS基團本身水解是一對競爭反應)。當然此處要綜合考慮使用性能和成本，有些客戶偶聯少量的蛋白便可滿足使用需求，這時采用低濃度的蛋白便可，這樣可以降低成本。
4. 封閉這一步可以采用試劑盒中自帶的3 M乙醇胺，也可使用Tris緩沖液(100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0)，封閉時間不得低于2 h，如果化學封閉后背景仍然很高，還可以額外加一步BSA封閉。
蛋白偶聯操作步驟：
以下操作過程以取磁珠樣品500μL，采用1.5 mL EP管為例介紹。用戶可根據自身需求按比例調整：
1. 蛋白溶液配制：
取適量待偶聯蛋白用Coupling Buffer溶解，配成濃度為0.1-3.0 mg/mL的蛋白溶液。已經保存于buffer 中的蛋白，需要通過透析或者脫鹽的方法徹底除去原有buffer里含伯胺基的物質，然后再用Coupling Buffer配成濃度為0.1-3.0 mg/mL的蛋白溶液，將配制好的蛋白溶液于4℃保存備用。
注：(1)為了達到更好的性能，當蛋白濃度≥2 mg/mL時，此時偶聯效率會更高，不過需根據成本和使用要求綜合考慮；
(2)蛋白溶液中不能含有帶伯氨基的成分，比如Tris，甘氨酸，明膠，BSA等；
2. 取500 μL磁珠于1.5 mLEP管中。
注：磁珠取樣前要反復顛倒、使用渦旋振蕩器或者垂直混合儀使其混合均勻，以保證實驗的同一性。
3. 將EP管置于磁性分離架內，富集磁珠，去除上清液。
4. 加1 mL 2～8℃的預冷的Washing Buffer A于1.5 mL EP管中，渦旋15 s，使磁珠混合均勻。
5. 將EP管置于磁性分離架內，富集磁珠，去除上清液。
6. 加500 μL蛋白溶液于EP管中，渦旋30 s，使其混合均勻。
7. 將EP管渦旋15 s，置于垂直混合儀上，室溫混合1～2 h。如果垂直混合不均勻，則反應前30 min，每隔5 min取下EP管渦旋15 s。此后，每隔15 min，取下EP管渦旋15 s。
8. 采用磁性分離架富集磁珠，保存流穿液。
9. 加1 mL Blocking Buffer于EP管中，渦旋30 s，將EP管置于磁性分離架內，富集磁珠，棄上清液。
注：Blocking Buffer除了試劑盒中提供的3 M乙醇胺外，也可以使用100 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, pH 8.0等其它封端試劑。
10. 重復“步驟9”操作四次。
11. 加1 mL Blocking Buffer于EP管中，渦旋30 s，將EP管置于垂直混合儀中室溫反應2 h。
12.將EP管置于磁性分離架內，富集磁珠，棄上清液。
13.加1 mL 超純水于EP管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。
14.加1 mL Storage Buffer(比如含0.05%疊氮化鈉的PBS緩沖液，或者客戶根據自己實際需求選擇合適的保存溶液 )于EP管中，充分混合，用磁力架富集磁珠，棄上清液。重復該操作2次。
15.加入500 μL Storage Buffer于EP管中，充分混合，4℃保存備用。
注：zuì終偶聯蛋白后的磁珠濃度為10 mg/mL。
注意事項：
1. 磁珠對水敏感。為了保證產品質量，在取樣之后需立即蓋上瓶蓋，并用封口膜密封，于4℃保存。
2. 禁止將磁珠干燥或冷凍。干燥和冷凍操作可能導致磁珠的聚集從而喪失結合活性。
3. 可通過間接法(e.g., Thermo Scientific?Pierce?660nm Protein Assay, Product No. 22660 and 22662)測定反應前后蛋白含量，或通過直接法(e.g.,use the Thermo Scientific?Pierce?Micro BCA Protein Assay ，Product No. 23235)檢測偶聯到磁珠表面的蛋白含量，使用280 nm附近的波長來測定蛋白含量是不可取的，因為NHS基團在280 nm波長附近有很強的吸收，會嚴重干擾檢測結果。
4. 蛋白穩定劑(如BSA，gelatin)會抑制抗體與磁珠的結合，因此在磁珠偶聯抗體過程中，需要確?？贵w保存體系中不存在含伯氨基的蛋白穩定劑。
5. 緩沖液中含有帶伯胺的物質會抑制蛋白質偶聯到磁珠表面，去除伯胺物質可采用透析和脫鹽的方法。
6. NHS基團易水解，故在用Washing buffer A洗滌時，一定要參照說明書進行。
7. 蛋白溶液要預先配制好，Washing buffer A洗滌完畢后，要立即加入蛋白溶液進行偶聯反應。
8. 蛋白質和磁珠的偶聯效率因蛋白質種類和性質差異而不同。一般而言，蛋白質濃度為0.1-3.0 mg/mL時利于蛋白質偶聯；然而，對于不同的蛋白其濃度需要優化。

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CZ005 鎳離子螯和His-tag蛋白純化磁珠 5ml/2×50ml/4×250ml
CZ008 Strep-tag II蛋白純化磁珠 5ml/50ml/250ml
CZ014 DEAE陰離子交換磁珠 5ml/100ml/1000ml
CZ015 300nm鏈霉親和素磁珠 1ml/10ml/100ml
CZ018 Mag NHS磁珠 1ml/5ml/50ml
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名稱：鎳離子螯和His-tag蛋白純化磁珠
貨號：CZ005
規格：5ml/2×50ml/4×250ml
產品簡介：
組氨酸標簽蛋白純化磁珠具有超順磁性，專為、快速純化組氨酸標簽蛋白而設計的一種功能化材料?？赏ㄟ^磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，大地簡化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業領域便捷地進行組氨酸標簽蛋白純化。
與傳統層析方式使用的金屬螯合瓊脂糖預裝柱相比，采用磁珠純化組氨酸標簽蛋白，無需對樣品進行多次長時間的高速離心和濾膜過濾、無需控制流速、更無需高昂的層析設備。樣品與磁珠的特異性結合、洗滌以及目標蛋白的洗脫變得簡單、快速、易操作。對于熟練的操作者而言，在1 h內就能獲得高純度的目標蛋白，且能輕松實現高通量和大規模樣品的平行處理，為研究者節省了時間和成本。
本產品系列包括鎳離子(Nickel)、鈷離子(Cobalt)兩種金屬離子螯合磁珠，它們在目標蛋白結合量和非特異性吸附等性能上有所區別，用戶可根據目標蛋白與不同種類金屬的結合性能，以及對目標蛋白的產量和純度的要求，選擇不同種類的金屬離子螯合磁珠。具體產品信息及規格參考《產品特性》。
保質期 在2～8℃可穩定保存，保質期2年
注1：磁珠蛋白結合量與目標蛋白特性有關，此處僅做參考值
注2：1 mL 磁珠懸液中包含100 μL磁珠
注3：磁珠溶劑耐受性請參考附錄信息
適用范圍：
適用于純化細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等分泌或胞內表達的可溶性組氨酸標簽蛋白，也可用于變性蛋白的純化(包涵體需變性后再進行純化)。
操作流程：
1. 緩沖液的準備
目標蛋白與組氨酸標簽蛋白純化磁珠的結合性能將直接影響目標蛋白的純化效率，而各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標蛋白的回收率和純度。因此，在較大規模蛋白純化之前，用戶應該自行設計實驗，篩選出適合純化目標蛋白的緩沖液體系，主要包括Binding Buffer、Washing Buffer、Elution Buffer。
增加咪唑濃度進行洗脫是組氨酸標簽純化磁珠zuì常用的洗脫方法，次使用時，在不確定zuì佳的洗脫咪唑濃度情況下，推薦在緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、400 mM、500 mM咪唑，濃度從低到高分別洗脫，磁吸后收集蛋白上清液，之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。
以下提供的緩沖液體系適用于多數組氨酸標簽蛋白的純化，供用戶參考。
Binding Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，5～50 mM Imidazole，pH7.4
Washing Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，50～100 mM Imidazole，pH7.4
Elution Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，500 mM Imidazole，pH7.4
2. 樣品處理
本說明書提供以下三種樣品的處理方法：
(1)大腸桿菌、酵母等細胞內表達蛋白：表達細胞用適量的Binding Buffer稀釋，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，重懸細胞，冰浴超聲裂解細胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過于粘稠，可根據需要在粗樣品中加入適量核酸酶，冰浴30 min，以降解核酸。另外，用戶也可以根據實際需要對蛋白樣品進行離心操作。
(2)胞外表達蛋白：取胞外表達上清，用等量Binding Buffer稀釋，即為粗蛋白樣品。
(3)動物細胞胞內表達蛋白：取適量動物細胞，先用適量PBS洗滌1次，棄上清；接著用適量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重懸，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，冰浴10 min，即為粗蛋白樣品。
3. 磁珠預處理
一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據目標蛋白產量和磁珠載量信息計算獲得。例如：采用大腸桿菌表達某目標蛋白，500 mL發酵液收獲2 g濕重的菌體，通過預實驗估算其目標蛋白產量為10～20 mg，用戶需要取5 mL磁珠懸液用于目標蛋白的純化。以下即以此為例進行詳細說明：
(1)將磁珠產品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取5 mL磁珠懸液于15 mL離心管中，進行磁性分離*，棄上清液，從磁性分離器上取下離心管。
(2)加入5 mL Binding Buffer到上述裝有磁珠的離心管中，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮；進行磁性分離，移去上清液。重復洗滌2次。
(注*：在磁性分離過程中，為了減少磁珠在使用過程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉數次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。)
4. 目標蛋白與磁珠結合
(1)用10 mL Binding Buffer懸浮2 g濕重的菌體，進行破碎和裂解之后，即為目標粗蛋白樣品，加入到裝有預處理磁珠的離心管中，將離心管置于漩渦混勻器振蕩15 s。
(2)將離心管置于旋轉混合儀上，室溫旋轉混合20～30 min(如果需要，可以在2～8℃ 的低溫環境下，旋轉混1 h，防止目標蛋白降解)。
(3)將離心管置于磁性分離器上進行磁性分離，移出上清液至新的離心管中以備后續檢測，從磁性分離器上取下離心管進行后續洗滌步驟。
5. 磁珠洗滌
(1)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管中，輕輕翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測。重復此步驟1次。
(2)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉移到新的離心管(避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標蛋白)，磁性分離，移出上清液到清洗液收集管。
6. 目標蛋白洗脫
(1)用戶可根據需要改變洗脫體積調整目標蛋白濃度，加入2～10 mL Elution Buffer，輕輕翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標蛋白樣品。
(2)如果需要，可以重復上述步驟1次，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標蛋白是否洗脫完全。
7. 磁珠后處理
(1)在裝有磁珠的離心管中加入5 mL Elution Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)重復上述步驟2次。
(3)在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(4)重復上述步驟2次。
(5)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)，可用于下一次同種蛋白的純化。
8. 磁珠再生
磁珠連續使用三次以上，其結合目標蛋白的能力可能會明顯降低，建議進行磁珠再生處理。
Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 7.4
Beads Washing Buffer(可選)：0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer：100 mM NiSO4/CoCl2(該化學試劑有一定的毒性，可能造成過敏反應，使用時務必注意)
Storage Buffer：20%(v/v)乙醇
以5 mL 10%(v/v)磁珠懸液為例，詳細說明磁珠再生操作：
(1)將磁珠懸液進行磁性分離，去除上清液，從磁性分離器上取下離心管，在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)加入5 mL Stripping Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合5 min，磁性分離，去除上清液。重復此步驟1次。
(3)加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液，重復此步驟2次。
(4)堿處理：加入5 mL Beads Washing Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合5 min，磁性分離，去除上清液。加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復 ddH2O洗滌步驟3～5次，至洗滌液呈中性為止。
(5)加入5 mL Recharge Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合20 min，磁性分離，去除上清液。
(6)加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復此步驟4次以上，保證鎳離子去除完全。
(7)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)。
蛋白純化流程的優化：
以上操作流程適用于大部分組氨酸標簽蛋白的純化，根據目標蛋白與金屬離子螯合磁珠的結合性能不同，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進行優化，以提高目標蛋白的回收率和純度。
提高目標蛋白回收率的參考方法：
(1)降低樣品溶液和Binding Buffer中的Imidazole濃度；
(2)樣品溶液和其它緩沖液中添加表面活性劑等物質；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延長蛋白與磁珠孵育的時間；
(6)延長洗脫目標蛋白的時間或增加洗脫次數。
提高目標蛋白純度的參考方法：
(1)提高樣品溶液和Binding Buffer中Imidazole、NaCl的濃度；
(2)樣品和緩沖液中添加表面活性劑等物質；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)延長洗滌的時間，增加洗滌次數；
(5)采用梯度Imidazole濃度洗脫目標蛋白。
注意事項：
1. 次使用本產品前，請務必詳細閱讀本說明書；
2. 磁珠使用和保存過程中應避免冷凍、干燥和高速離心等操作；
3. 在使用本產品前，請務必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態；
4. 請選用質量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過程發生滲漏引起磁珠的損耗；
5. 磁珠與溶液混合過程中，如果溶液粘稠無法通過翻轉離心管重懸磁珠，可采用移液器反復吹吸或短時漩渦混合使磁珠充分重懸；
6. 用戶可根據實際需要保留經磁性分離移去的上清液，進行取樣檢測，以便分析純化過程和優化蛋白純化流程；
7. 本產品可以重復使用，當純化性能降低時，建議進行再生處理；
8. 使用過的磁珠重復使用時，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時，建議使用新的磁珠；
9. 本產品需與磁性分離器配套使用；
10. 本產品僅供研究使用。

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