SY0553 細胞膜可滲透鈣離子熒光探針
- 產品/服務：SY0553 細胞膜可滲透鈣離子熒光探針
- 型 號：SY0553
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-23
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1095
產品簡介
細胞膜可滲透鈣離子熒光探針由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多細胞膜可滲透鈣離子熒光探針等探針標記及檢測產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括細胞膜可滲透鈣離子熒光探針在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：細胞膜可滲透鈣離子熒光探針
英文名稱：Fura-2, AM, Cell Permeant
產品貨號：SY0553
產品規格：50μg|5×50μg|1mg
Fura-2是細胞生物學常用的一種鈣熒光探針，能特異性地結合Ca2+（結合比例為1:1），同時可發出熒光，結合Ca2+后的zuì大激發波長從結合前的380nm向340nm（Ca2+飽和時）偏移，其發射熒光強度與結合Ca2+的濃度存在定量關系。一般用340nm和380nm波長激發Fura-2，通過使用與兩種激發對應的熒光強度比率來計算細胞內的鈣離子濃度，這種比率測量方法可以消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異，熒光探針的滲漏，細胞厚度差異等一些誤差因素。Fura-2與Indo-1已成為目前使用zuì廣泛的比率測量的鈣熒光指示劑。目前適用于Fura 2實驗的設備有很多，但Fura-2特別適合于數字成像顯微鏡，使用該設備可更方便的調整激發波長，使探針結合鈣離子后在300-400nm的激發波長范圍內掃描Fura-2的吸收偏移，在510nm處檢測發射波長。
由于Fura-2是性大的酸性化合物，無法進入細胞內，為此在其負性基團上結合乙酰氧甲酯，使其成為Fura-2/AM，該變化既增加了酯溶性又消除了負電荷，大的提高了細胞滲透性。在細胞內，Fura-2/AM被酯酶水解成Fura-2后可與胞漿游離Ca2+可逆性結合。
CAS：108964-32-5
分子式：C44H47N3O24
分子量：1001.86
Ex/Em：363nm/512nm
溶解性：溶液DMSO.
儲存條件：-20℃避光干燥。
結構式
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名稱：5′末端同位素標記試劑盒
貨號：BTN131036
規格：20次
本產品為DNA 5′末端標記系統，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 對粘性末端或平末端的DNA或RNA的5′末端進行標記反應。原理如下：
產品特點：
1. 使用本試劑盒之前，不需要對 5′末端的磷酸基團進行去磷酸化處理，因為使用的kinase 能使5′末端的磷酸與[γ-32P]ATP的γ-磷酸進行交換。
2. 合成的單鏈或雙寡核苷酸的5′末端游離的OH基團都能通過Kinase反應被標記(或者只是簡單的磷酸化)。
3. 提供的兩種反應液使交換反應和磷酸化反應都能進行，均能得到大于106 cpm/pmol(5′-end)的比活性。
試劑盒組份：
| 成分 | 規格 |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 20μl |
| 5×交換反應緩沖液 | 100μl |
| 10×磷酸緩沖液 | 50μl |
|
Co | 20μl |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一、交換反應
1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
| 自備的5′磷酸化DNA片段 | 14μL(≤5 pmoles的5′末端) |
| 5×交換反應緩沖液 | 5μL |
| [γ-32P]ATP | 5μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 滅菌的超純水 | 補足到25μL |
注：5 pmoles的5′末端約等于0.17μg的長100bp的雙鏈DNA。
3. 37℃反應30分鐘。
4. 70℃加熱5～10分鐘使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀時使其終濃度達300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷無水乙醇，-20℃放置30～60分鐘。
7.離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。
注：通過第5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要完全將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用苯酚抽提除去蛋白質時，請在第8 步之后進行。
二、磷酸化反應標記
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/lǜ仿、3 M NaCl 、乙醇、70%乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
| 自備的DNA片段 | 133μL(≤10μg) |
| 1M Tris-HCl，pH8.0 | 15μL |
| 牛小腸堿性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL) | 2μl |
| 滅菌的超純水 | 補足到150μL |
3. 50℃反應30分鐘。
4. 加入150μl的TE 飽和酚/lǜ仿/異戊醇(25：24：1)，充分混勻。
5.離心，取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(zuì終濃度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷無水乙醇，-20℃放置30～60分鐘。
9.離心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。
B. 磷酸化反應(前反應)
1.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
| 自備的DNA片段 | 20.5μL(≤5 pmoles的5′末端) |
| 10×磷酸緩沖液 | 2.5μL |
| [γ-32P]ATP | 1μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 滅菌的超純水 | 補足到25μL |
2. 37℃反應30分鐘。
3.下面的操作與交換反應的第4-8 步操作相同。
三、合成DNA 寡核苷酸的標記
1.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
|
Oligo | ≤3μL |
| 10×磷酸緩沖液 | 2.5μL |
| [γ-32P]ATP | 1μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 滅菌的超純水 | 補足到25μL |
2. 37℃反應30分鐘。
3.下面的操作與交換反應的第4-8 步操作相同。
四、合成DNA 寡核苷酸的標記
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入的dNTPs效果很好，它還能大幅減少小于20個堿基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的雙鏈DNA的量。使用之前需要在70℃加熱5～10分鐘以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于10個堿基的寡核苷酸。
注意事項：
1.緩沖液可在室溫融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混勻。
2. 5×交換反應緩沖液于-20℃凍結保存時會有白色渾濁出現，但不影響反應效果。
3.酶切得到的DNA片段需經乙醇沉淀等方法純化。
4. 當用于交換反應的DNA在5 pmoles以上(約1,000bp以上)時，標記效率有時會低于106 cpm/pmol。
5. 如果交換反應所用 DNA低于500bp時，標記效率有時會有所降低。
6. 若不進行放射線標記，僅使用本試劑盒做5′末端磷酸化反應時，反應體系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反應時的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。
使用舉例：
按照使用方法中交換反應和合成DNA 寡核苷酸的標記的實驗操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通過正向磷酸化反應或交換反應標記。各DNA片段的放射自顯影結果如下所示：
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