RFT117 pUC18載體
- 產(chǎn)品/服務(wù)：RFT117 pUC18載體
- 型 號(hào)：RFT117
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-05-31
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：959
產(chǎn)品簡介
pUC18載體是高品質(zhì)的克隆與表達(dá)產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多pUC18載體等克隆與表達(dá)產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括pUC18載體在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：pUC18載體
英文名稱：pUC18 vector
產(chǎn)品貨號(hào)：RFT117
產(chǎn)品規(guī)格：2μg
pUC18載體適用于雙脫氧法對DNA 片段進(jìn)行測序，它克隆的DNA 片段比使用 M13 phage作載體時(shí)克隆的片段長。 由于在 lacZ 領(lǐng)域中含有多克隆位點(diǎn)， 因此可以在含有 IPTG、 X-Gal的平板培養(yǎng)基上通過藍(lán)白篩選判斷載體中有無 DNA 片段的插入。同時(shí)還可以通過載體上的lac promoter表達(dá)外源基因， 使用M13系列的通用引物對插入載體中的DNA片段進(jìn)行測序。
貯存液：10 mM Tris-HCl(pH8.0) ，1 mM EDTA。
鏈長：2686 bp。
制備：使用 CsCl-EtBr 密度梯度超離心法純化。
純度：
1、含 70%以上的雙鏈 Covalently closed circular DNA(RFI) 。
2、用雙脫氧測序法確認(rèn)多克隆位點(diǎn)。
3、確認(rèn) EcoR I，Sac I，Kpn I，Sma I，BamH I，Xba I，Sal I，Pst I，Sph I 和 Hind III只有一個(gè)酶切位點(diǎn)。
用途：
1、外源基因的克隆以及使用 lac 啟動(dòng)子進(jìn)行表達(dá)。
2、使用 M13 系列引物進(jìn)行 DNA測序。
儲(chǔ)存條件：-20℃。
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| 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
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| BTN90208 | pression/BTN90208.html" target="_blank">大腸桿菌SURE化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 0.1mL*10 |
| BTN140388 | pression/BTN140388.html" target="_blank">釀酒酵母NMY51感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μL |
| BTN70602 | pression/BTN70602.html" target="_blank">DNA快速連接試劑盒 | 100次 |
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名稱：cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
貨號(hào)：BTN90407C
規(guī)格：5μg
本產(chǎn)品Lambda DNA(λDNA)為λ噬菌體中的DNA，是一種常見的DNA底物，分子量為31.5×106Da/48502bp，濃度為200～500μg/ml。A型為普通Lambda DNA。B型為不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型為非甲基化的cl857 Sam7 λDNA，是從感染的大腸桿菌GM119菌株中分離得到的。該菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作為對DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
儲(chǔ)存溶液：Tris-HCl(pH8.0)10mM；EDTA 1mM
儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸、-20℃保存、有效期一年。
純度：
1. OD260nm/280nm＞1.8。
2. 瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)清晰單一條帶。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保溫16小時(shí)后，瓊脂糖凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)清晰單一條帶。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃，2小時(shí))后，在瓊脂糖凝膠電泳時(shí)出現(xiàn)8條清晰的DNA電泳帶。
名稱：大腸桿菌Rosetta-gami (DE3)pLys化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
貨號(hào)：BTN130560
規(guī)格：0.1mL*10
Rosetta-gami(DE3)pLysS是Rosetta-gami(DE3)的的衍生菌株，用于具有毒性的含二硫鍵真核蛋白的表達(dá)。它是高度嚴(yán)緊表達(dá)宿主菌，包括Tunerlac 透性酶突變以及gor B/gor突變幫助細(xì)胞質(zhì)內(nèi)二硫鍵形成。
基因型：Δ(ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F"[lac+lacIq pro](DE3)gor522::Tn10(TcR)gorB::kan plysS pRARE(CmR)
儲(chǔ)存條件：干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養(yǎng)基等。
使用方法：
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μL，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。
以下實(shí)驗(yàn)以50μL感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個(gè)離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
注意事項(xiàng)：
1. 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過離心(4,000rpm，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2. 新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
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