SY0572 線粒體紅色熒光探針
- 產品/服務：SY0572 線粒體紅色熒光探針
- 型 號：SY0572
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-05-25
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1175
產品簡介
線粒體紅色熒光探針是高品質的探針標記及檢測產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多線粒體紅色熒光探針等探針標記及檢測產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括線粒體紅色熒光探針(CMXRos)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：線粒體紅色熒光探針(CMXRos)
英文名稱：Mitocho
產品貨號：SY0572
產品規格：50μg
CMXRos是一種細胞滲透型的X-rosamine衍生物，包含標記線粒體的弱巰基反應性的氯甲基官能團。本品是一種氧化型的紅色熒光染料（Ex=579 nm，Em=599 nm），只需簡單孵育細胞，即可被動運輸穿過細胞膜并直接聚集在活性線粒體上。一旦線粒體被染色后，還能根據后續實驗的需求進行固定（醛類固定劑如甲醛）和透化（醛類去污劑如Triton X-100），探針依然維持在細胞內。本品適合雙標實驗，因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率。
雖然傳統的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123，也能很容易的聚集在功能線粒體上，但是一旦線粒體膜電位喪失即會被洗掉，從而在一些需要細胞進行醛類固定或者包含線粒體能量狀態影響因子的實驗中，使其應用大受限制。
CAS：167095-09-2
分子式：C32H32Cl2N2O
分子量：531.52
外觀：紫色固體
激發波長：579 nm
發射波長：599 nm
儲存條件：-20℃避光干燥
結構式
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名稱：隨機引物法DNA探針生物素標記試劑盒
貨號：BTN90603B
規格：5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發明的隨機引物標記法而開發出來的即用型DNA探針標記試劑盒，標記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機引物與單鏈DNA結合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：
本產品對Feinberg和Vogelstein經典方法進行了改良。
產品特點：
1. 提供的標記反應液整合了除酶和模板外的所有成分，簡化了反應加樣步驟，提高了標記反應的可重復性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標記DNA探針不會被酶降解。
3.快速，zuì快1小時即可完成標記反應。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達到109cpm/μg DNA)，檢測靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線狀和環狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點印跡雜交等。
7. 提供三種標記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標記和其他任何非同位素標記，但需自備標記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和地gāo辛標記，不需自備標記底物。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 2×A型標記反應液(自備標記物型) | 50μl(僅A型有) |
| 2×B型標記反應液(生物素型) | 50μl(僅B型有) |
| 2×C型標記反應液(DIG型) | 50μl(僅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超純水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×標記反應液(ABC三種之一) | 10μl |
| 超純水 | 補水到15μl |
注意：非同位素標記物由于疏水性強，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因為模板會在雜交反應中跟標記的探針雜交，競爭性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數秒使所有液體集中在管底，根據試劑盒類型加入下列成份：
| 試劑盒類型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 |
dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標記dUTP混合物(見注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
| BTN90603C型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
注：上表中的dTTP/標記dUTP混合物中dTTP和標記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標記生物素或DIG標記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標記的dUTP，則用戶需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時。標記效率跟模版量和保溫時間相關，具體見下表：
| 模版DNA用量 | 1小時后探針合成量 | 20小時后探針合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應液中即可。如果電泳檢測，標記產物將是彌散狀態。
注意：本方法標記核苷酸摻入率高，因此可以不經純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標記的DNA探針，因為這些標記分子疏水性強，能使標記的DNA進入疏水的有機相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購非同位素探針柱式純化試劑盒)。對比活高的同位素探針，由于其其不穩定，因此應該立即使用，不要長久放置。
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