DEAE陰離子交換磁珠是高品質的磁珠微球產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多DEAE陰離子交換磁珠等磁珠微球產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括DEAE陰離子交換磁珠在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：DEAE陰離子交換磁珠
產品貨號：CZ014
產品規格：5ml/100ml/1000ml

產品簡介：
DEAE是一種弱陰離子交換磁珠，具有快速的磁響應性、豐富的離子交換能力和高的蛋白結合能力。離子交換配基為二乙氨乙基(diethylaminoethyl，DEAE)，該配基在pH 3-12的工作范圍內仍然能夠保持穩定的高蛋白結合能力。
與傳統柱層析純化方式相比，DEAE磁珠無需對粗蛋白樣品進行預處理(如：反復繁瑣的離心，費時費力的過濾操作)，此外，無需控制流速及柱壓，不需要昂貴的層析設備。對于熟練的操作者來說，在很短時間內就能完成高純度目的蛋白的提取，且能輕松實現多個樣品的平行處理，實現高通量的蛋白純化。
保質期：在2～8℃可穩定保存，保質期2年。
注：1. 蛋白結合量與目標蛋白特性相關，此處僅作參考值；
2. 1 mL磁珠懸液中含有100 μL磁珠。
產品：
1. 磁響應速度快，減少操作時間
2. 磁珠具有良好的分散性和重懸性，提高操作的便捷性
3. 配基具有良好的物理化學穩定性，提高了實驗結果的可靠性及可重復性
操作流程(以純化含BSA蛋白樣品為例)：
1. 磁珠預處理(平衡)：將DEAE磁珠漩渦振蕩30 s，使磁珠充分重懸；取一定量的10%(v/v)磁珠懸液置于50 mL離心管中。對磁珠懸液進行磁性分離，棄上清液，加入20 mL 平衡緩沖液洗滌磁珠3次，每次垂直混合2 min。
注：為了獲得目標蛋白的zuì大回收率，實驗者需要加入過量的DEAE磁珠，一般大于蛋白結合量的20%即可。對于含較低豐度目標蛋白的樣品中，磁珠對目標蛋白的回收率會有所降低，因此需要繼續增大磁珠的用量；
2. 蛋白吸附：將預處理的磁珠加入含BSA蛋白的樣品溶液中，漩渦振蕩30 s，置于垂直混合儀混勻30～60 min，使樣品和磁珠充分接觸并吸附，然后進行磁性分離，移棄上清液。
注：為了更有效率的吸附結合物質，平衡緩沖液zuì好含有較低的離子強度，選擇的pH值應該至少與目標蛋白的等電點相差一個pH單位，選定的鹽緩沖液pH波動在0.5 pH以內。目標蛋白與磁珠的吸附時間與蛋白的本身屬性有關。
3. 磁珠洗滌：加入20 mL的平衡緩沖液，漩渦振蕩重懸磁珠30 s后進行磁性分離，移棄上清液；該操作重復3次。
4. 蛋白洗脫：在上述完成磁珠洗滌的離心管中加入適量的洗脫液進行蛋白洗脫。用移液器吹打或者渦旋振蕩下迅速重懸，然后將離心管置于垂直混合儀混勻10～15 min后進行磁性分離，收集上清液至新的離心管中。洗脫方式主要有高鹽濃度洗脫(含1-2 M的NaCl的平衡緩沖液)和低pH洗脫(選擇低于目標蛋白等電點的pH范圍即可)兩種。
5. 磁珠再生：一般采用2 M NaCl溶液洗滌3～5次，然后用平衡緩沖液進行再平衡處理。磁珠多次使用后會有沉淀蛋白、強疏水性蛋白、脂蛋白等雜質非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議進行在位清洗(CIP)。
6. 在位清洗(CIP)：依次采用 1.0 M NaOH、70%乙醇或30%異丙醇、純化水洗滌磁珠2次；zuì后加入20%乙醇重懸磁珠，置于2～8℃保存。
注意事項：
1. 本產品不宜冷凍、干燥或離心操作。冷凍、干燥和離心等操作會引起磁珠團聚，不易于重懸和分散，并且影響磁珠表面功能基團的化學活性。
2. 在使用本產品前，請務必充分振蕩或超聲使磁珠保持均勻的懸浮狀態。
3. 使用過程中可根據需求，用純化水或緩沖液磁吸洗滌磁珠 2～3次，以去除保存液中乙醇。
4. 本產品需與磁性分離設備配套使用。
5. 鹽濃度與pH值均會影響特異性蛋白的結合與洗脫，客戶需自行摸索不同蛋白的結合和洗脫條件，以保證蛋白純化量和純度。
6. 本產品僅供研究使用。

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名稱：鈷離子螯和His-tag蛋白純化磁珠
貨號：CZ006
規格：5ml/2×50ml/4×250ml
產品簡介：
組氨酸標簽蛋白純化磁珠具有超順磁性，專為、快速純化組氨酸標簽蛋白而設計的一種功能化材料?？赏ㄟ^磁性分離方式直接從生物樣品中一步純化出高純度的目標蛋白，大地簡化純化工藝和提高純化效率，適合科研和工業領域便捷地進行組氨酸標簽蛋白純化。
與傳統層析方式使用的金屬螯合瓊脂糖預裝柱相比，采用磁珠純化組氨酸標簽蛋白，無需對樣品進行多次長時間的高速離心和濾膜過濾、無需控制流速、更無需高昂的層析設備。樣品與磁珠的特異性結合、洗滌以及目標蛋白的洗脫變得簡單、快速、易操作。對于熟練的操作者而言，在1 h內就能獲得高純度的目標蛋白，且能輕松實現高通量和大規模樣品的平行處理，為研究者節省了時間和成本。
本產品系列包括鎳離子(Nickel)、鈷離子(Cobalt)兩種金屬離子螯合磁珠，它們在目標蛋白結合量和非特異性吸附等性能上有所區別，用戶可根據目標蛋白與不同種類金屬的結合性能，以及對目標蛋白的產量和純度的要求，選擇不同種類的金屬離子螯合磁珠。具體產品信息及規格參考《產品特性》。
保質期 在2～8℃可穩定保存，保質期2年
注1：磁珠蛋白結合量與目標蛋白特性有關，此處僅做參考值
注2：1 mL 磁珠懸液中包含100 μL磁珠
注3：磁珠溶劑耐受性請參考附錄信息
適用范圍：
適用于純化細菌、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞等分泌或胞內表達的可溶性組氨酸標簽蛋白，也可用于變性蛋白的純化(包涵體需變性后再進行純化)。
操作流程：
1. 緩沖液的準備
目標蛋白與組氨酸標簽蛋白純化磁珠的結合性能將直接影響目標蛋白的純化效率，而各種緩沖液配制也將在一定程度上影響目標蛋白的回收率和純度。因此，在較大規模蛋白純化之前，用戶應該自行設計實驗，篩選出適合純化目標蛋白的緩沖液體系，主要包括Binding Buffer、Washing Buffer、Elution Buffer。
增加咪唑濃度進行洗脫是組氨酸標簽純化磁珠zuì常用的洗脫方法，次使用時，在不確定zuì佳的洗脫咪唑濃度情況下，推薦在緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、400 mM、500 mM咪唑，濃度從低到高分別洗脫，磁吸后收集蛋白上清液，之后通過SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結果。
以下提供的緩沖液體系適用于多數組氨酸標簽蛋白的純化，供用戶參考。
Binding Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，5～50 mM Imidazole，pH7.4
Washing Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，50～100 mM Imidazole，pH7.4
Elution Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，500 mM Imidazole，pH7.4
2. 樣品處理
本說明書提供以下三種樣品的處理方法：
(1)大腸桿菌、酵母等細胞內表達蛋白：表達細胞用適量的Binding Buffer稀釋，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，重懸細胞，冰浴超聲裂解細胞，即為粗蛋白樣品。如果樣品過于粘稠，可根據需要在粗樣品中加入適量核酸酶，冰浴30 min，以降解核酸。另外，用戶也可以根據實際需要對蛋白樣品進行離心操作。
(2)胞外表達蛋白：取胞外表達上清，用等量Binding Buffer稀釋，即為粗蛋白樣品。
(3)動物細胞胞內表達蛋白：取適量動物細胞，先用適量PBS洗滌1次，棄上清；接著用適量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重懸，加入蛋白酶抑制劑(如終濃度為1 mM的PMSF)，冰浴10 min，即為粗蛋白樣品。
3. 磁珠預處理
一般情況下，磁珠的使用量是由用戶根據目標蛋白產量和磁珠載量信息計算獲得。例如：采用大腸桿菌表達某目標蛋白，500 mL發酵液收獲2 g濕重的菌體，通過預實驗估算其目標蛋白產量為10～20 mg，用戶需要取5 mL磁珠懸液用于目標蛋白的純化。以下即以此為例進行詳細說明：
(1)將磁珠產品置于漩渦混勻器上充分混勻，用移液器取5 mL磁珠懸液于15 mL離心管中，進行磁性分離*，棄上清液，從磁性分離器上取下離心管。
(2)加入5 mL Binding Buffer到上述裝有磁珠的離心管中，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸?。贿M行磁性分離，移去上清液。重復洗滌2次。
(注*：在磁性分離過程中，為了減少磁珠在使用過程中的損耗，待溶液變澄清后，蓋緊離心管蓋子，保持離心管仍在磁性分離器上，手持磁性分離器與離心管上下翻轉數次，使澄清的溶液涮洗離心管蓋上殘留的磁珠，靜置片刻，使溶液重新變澄清；以下同。)
4. 目標蛋白與磁珠結合
(1)用10 mL Binding Buffer懸浮2 g濕重的菌體，進行破碎和裂解之后，即為目標粗蛋白樣品，加入到裝有預處理磁珠的離心管中，將離心管置于漩渦混勻器振蕩15 s。
(2)將離心管置于旋轉混合儀上，室溫旋轉混合20～30 min(如果需要，可以在2～8℃ 的低溫環境下，旋轉混1 h，防止目標蛋白降解)。
(3)將離心管置于磁性分離器上進行磁性分離，移出上清液至新的離心管中以備后續檢測，從磁性分離器上取下離心管進行后續洗滌步驟。
5. 磁珠洗滌
(1)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管中，輕輕翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，移出清洗液到新的離心管中，以備取樣檢測。重復此步驟1次。
(2)加入10 mL Washing Buffer到裝有磁珠的離心管，使磁珠重新懸浮，將磁珠懸液轉移到新的離心管(避免原離心管壁上非特異性吸附蛋白污染目標蛋白)，磁性分離，移出上清液到清洗液收集管。
6. 目標蛋白洗脫
(1)用戶可根據需要改變洗脫體積調整目標蛋白濃度，加入2～10 mL Elution Buffer，輕輕翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，收集洗脫液到新的離心管中，即為純化的目標蛋白樣品。
(2)如果需要，可以重復上述步驟1次，收集樣品到新的離心管中，以檢測目標蛋白是否洗脫完全。
7. 磁珠后處理
(1)在裝有磁珠的離心管中加入5 mL Elution Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)重復上述步驟2次。
(3)在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠懸浮，磁性分離，去除上清液。
(4)重復上述步驟2次。
(5)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)，可用于下一次同種蛋白的純化。
8. 磁珠再生
磁珠連續使用三次以上，其結合目標蛋白的能力可能會明顯降低，建議進行磁珠再生處理。
Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 7.4
Beads Washing Buffer(可選)：0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer：100 mM NiSO4/CoCl2(該化學試劑有一定的毒性，可能造成過敏反應，使用時務必注意)
Storage Buffer：20%(v/v)乙醇
以5 mL 10%(v/v)磁珠懸液為例，詳細說明磁珠再生操作：
(1)將磁珠懸液進行磁性分離，去除上清液，從磁性分離器上取下離心管，在離心管中加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。
(2)加入5 mL Stripping Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合5 min，磁性分離，去除上清液。重復此步驟1次。
(3)加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液，重復此步驟2次。
(4)堿處理：加入5 mL Beads Washing Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合5 min，磁性分離，去除上清液。加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復 ddH2O洗滌步驟3～5次，至洗滌液呈中性為止。
(5)加入5 mL Recharge Buffer，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，室溫旋轉混合20 min，磁性分離，去除上清液。
(6)加入5 mL ddH2O，上下翻轉離心管數次，使磁珠重新懸浮，磁性分離，去除上清液。重復此步驟4次以上，保證鎳離子去除完全。
(7)加入Storage Buffer到磁珠中使總體積為5 mL，保存于2～30℃(長期保存，置于2～8℃)。
蛋白純化流程的優化：
以上操作流程適用于大部分組氨酸標簽蛋白的純化，根據目標蛋白與金屬離子螯合磁珠的結合性能不同，用戶可以從以下幾個方面對純化流程進行優化，以提高目標蛋白的回收率和純度。
提高目標蛋白回收率的參考方法：
(1)降低樣品溶液和Binding Buffer中的Imidazole濃度；
(2)樣品溶液和其它緩沖液中添加表面活性劑等物質；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延長蛋白與磁珠孵育的時間；
(6)延長洗脫目標蛋白的時間或增加洗脫次數。
提高目標蛋白純度的參考方法：
(1)提高樣品溶液和Binding Buffer中Imidazole、NaCl的濃度；
(2)樣品和緩沖液中添加表面活性劑等物質；
(3)添加合適的蛋白酶抑制劑，防止目標蛋白降解；
(4)延長洗滌的時間，增加洗滌次數；
(5)采用梯度Imidazole濃度洗脫目標蛋白。
注意事項：
1. 次使用本產品前，請務必詳細閱讀本說明書；
2. 磁珠使用和保存過程中應避免冷凍、干燥和高速離心等操作；
3. 在使用本產品前，請務必充分振蕩使磁珠保持均勻的懸浮狀態；
4. 請選用質量好的移液器吸頭和離心管，以免磁珠貼壁或混合過程發生滲漏引起磁珠的損耗；
5. 磁珠與溶液混合過程中，如果溶液粘稠無法通過翻轉離心管重懸磁珠，可采用移液器反復吹吸或短時漩渦混合使磁珠充分重懸；
6. 用戶可根據實際需要保留經磁性分離移去的上清液，進行取樣檢測，以便分析純化過程和優化蛋白純化流程；
7. 本產品可以重復使用，當純化性能降低時，建議進行再生處理；
8. 使用過的磁珠重復使用時，建議純化同種蛋白，純化不同種類的蛋白時，建議使用新的磁珠；
9. 本產品需與磁性分離器配套使用；
10. 本產品僅供研究使用。

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