WE0209 磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒

產品簡介
磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持,本品僅用于生物化學研究方面,我公司的磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒品質上佳,經過多年的開發生產,已然非常成熟,歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示:包括磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:磁珠法口腔拭子DNA提取試劑盒
英文名稱:Magbead Swab DNA Extraction Kit
產品貨號:WE0209
產品規格:96次
本試劑盒提供了一種簡單、快速、的口腔拭子DNA提取方法,適用于從干燥保存或在保護液中保存的口腔拭子中提取基因組DNA。在高鹽存在時,DNA結合于硅基包被的Magbeads表面。漂洗后,高純度的DNA被洗脫于Buffer EB或去離子水中。純化得到的DNA純度好(A260/280的比值在1.7-1.9之間),完整度高(>15 kb),可用于二代測序、定量PCR、芯片檢測等下游實驗。
試劑盒組成:
| 組份 | 96次 |
| Buffer WL | 36ml |
| Buffer ML | 36ml |
| Buffer GW1(濃縮液) | 80ml |
| Buffer GW2(濃縮液) | 50ml |
| Buffer EB | 30ml |
| 蛋白酶K | 2×25mg |
| 蛋白酶K 儲存液 | 2×1.25ml |
| Magbeads PN | 1ml |
自備儀器及試劑:
1、手動單管操提取:
1)恒溫混勻儀
2)2/15ml磁力架
3)異丙醇、無水乙醇
2、手動96孔深孔板提取:
1)恒溫混勻儀
2)廢液抽吸系統
3)手動連續分液器
4)電動連續分液器
5)手動連續分液器分液管
6)96孔深孔板磁力架
7)異丙醇、無水乙醇
實驗前準備及重要注意事項:
1、向蛋白酶K 中加入用量(1.25ml/25mg)的蛋白酶K 儲存液使其溶解,-20℃保存。配置好的蛋白酶K 勿長時間室溫放置,避免反復凍融,以免影響其活性。
2、Magbeads嚴禁冰凍、離心。冰凍和離心可能會對Magbeads造成不可逆的損害。
3、Magbeads使用前需渦旋震蕩20秒使其充分混勻。
4、次使用前應按試劑瓶標簽在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無水乙醇并做好標記。
5、實驗過程中,磁珠在溶液中的充分混勻對于提取的得率與純度都有很大的影響。實驗過程中務必使磁珠與溶液充分混勻。不同廠家生產的恒溫混勻儀震蕩混勻效果有一定差異,實驗過程中請注意觀察磁珠狀態。如出現磁珠貼壁等未充分混勻的現象,請用移液器吹吸混勻或調整震蕩頻率
操作步驟:
I、手動單管操作:
方案一(用于從干燥保存的口腔拭子中提取基因組DNA):
1、將口腔拭子的棉簽用剪刀從桿上剪下,置于2.0ml的離心管中。
2、向離心管中加入20μl 蛋白酶K 和300μl Buffer WL,之后將離心管放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩裂解30分鐘。
注意:如無恒溫混勻儀,將離心管我選振蕩10秒后放于56℃水浴鍋中孵育30分鐘,期間每隔5分鐘渦旋振蕩10秒鐘。
3、將離心管從恒溫混合儀上取下,短暫離心后加入300μl Buffer ML。之后將離心管放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩裂解10分鐘。
注意:如無恒溫混勻儀,將離心管我選振蕩10秒后放于56℃水浴鍋中孵育30分鐘,期間每隔5分鐘渦旋振蕩10秒鐘。
4、將步驟3中的離心管短暫離心后室溫放置5分鐘,之后將裂解產物轉移至1.5ml的離心管中。向離心管中加入200μl異丙醇和10μl充分混勻的Magbeads,渦旋震蕩5秒鐘后將離心管放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻5分鐘或將離心管連續顛倒混勻10分鐘。
5、將離心管放于磁力架上靜置1分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
6、將離心管從磁力架上取下,加入750μl Buffer GW1(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態)。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
7、重復步驟6。
8、將離心管從磁力架上取下,加入750μl Buffer GW2(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態)。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
9、重復步驟8。
10、保持離心管固定于磁力架上,用移液器進一步去除離心管管底和管蓋上的溶液,之后室溫放置5-10分鐘,使乙醇揮發干凈。
注意:如果離心管側壁上有液珠,可向離心管中加入750μl無水乙醇,蓋蓋后顛倒離心管(保持離心管固定于磁力架上),之后徹底棄去無水乙醇。
11、將離心管從磁力架上取下,加入30-100μl Buffer EB。渦旋震蕩使磁珠完全懸浮于洗脫液中后將其放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩洗脫10分鐘,或將離心管放于56℃水浴鍋中孵育10分鐘,期間每隔3分鐘渦旋震蕩10秒鐘。
12、將離心管放于磁力架上靜置2分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后用移液器將洗脫液轉移至新的離心管中-20℃保存備用。
方案二(用于從在保護液中保存的口腔拭子中提取基因組DNA):
1、將口腔拭子的棉簽從桿上剪下,置于2.0ml的離心管中。
2、向離心管中加入20μl 蛋白酶K 、300μl保存該拭子的保護液和200μl Buffer ML,之后將離心管放于56℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩裂解30分鐘。
注意:如無恒溫混勻儀,將離心管我選振蕩10秒后放于56℃水浴鍋中孵育30分鐘,期間每隔5分鐘渦旋振蕩10秒鐘。
3、將離心管從從恒溫混合儀上取下,室溫放置5分鐘。短暫離心后,將裂解產物轉移至1.5ml的離心管中。
4、向離心管中加入300μl異丙醇和10μl充分混勻的Magbeads,渦旋震蕩5秒鐘后將離心管放于25℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩混勻5分鐘或將離心管連續顛倒混勻10分鐘。
5、將離心管放于磁力架上靜置1分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后充分棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
6、將離心管從磁力架上取下,加入750μl Buffer GW1(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態)。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
7、重復步驟6。
8、將離心管從磁力架上取下,加入750μl Buffer GW2(使用前請檢查是否已加入無水乙醇)后渦旋點震1分鐘或渦旋震蕩5秒鐘后放于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘(震蕩過程中確保Magbeads處于混勻狀態)。之后將離心管放于磁力架上靜置1分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后輕輕顛倒磁力架將離心管蓋上的雜質洗落后徹底棄去溶液(保持離心管固定于磁力架上)。
9、重復步驟8。
10、保持離心管固定于磁力架上,用移液器進一步去除離心管管底和管蓋上的溶液,之后室溫放置5-10分鐘,使乙醇揮發干凈。
注意:如果離心管側壁上有液珠,可向離心管中加入750μl無水乙醇,蓋蓋后顛倒離心管(保持離心管固定于磁力架上),之后徹底棄去無水乙醇。
11、將離心管從磁力架上取下,加入30-100μl Buffer EB。渦旋震蕩使磁珠完全懸浮于洗脫液中后將其放于56℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩洗脫10分鐘,或將離心管放于56℃水浴鍋中孵育10分鐘,期間每隔3分鐘渦旋震蕩10秒鐘。
12、將離心管放于磁力架上靜置2分鐘,待Magbeads完全吸附于離心管側壁后用移液器將洗脫液轉移至新的離心管中-20℃保存備用。
II、手動96孔板操作:
方案三(用于在96孔深孔板中從干燥保存的口腔拭子中提取基因組DNA):
1、將口腔拭子棉簽剪下放入96孔深孔板(簡稱“深孔板”)中并記錄每個孔中樣品名稱。
2、向加入口腔拭子的深孔板中用電動連續分液器或8通道移液器加入20μl 蛋白酶K 和 300μl Buffer WL,之后將深孔板放于100℃(該恒溫混勻儀為懸空加熱,裂解液實際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩孵育30分鐘。
3、將深孔板從恒溫混勻儀上取下,加入300μl Buffer ML。之后,將深孔板放于100℃(該恒溫混勻儀為懸空加熱,裂解液實際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩孵育10分鐘。
4、將深孔板從恒溫混合儀上取下,把裂解產物按照順序轉移至新的深孔板中。
5、向新的深孔板中加入210μl充分混勻的異丙醇(200μl)與Magbeads(10μl)混合物。之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩混勻5分鐘。
6、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
注意:用廢液抽吸系統去除溶液時,需將真空泵調節至較小的負壓值,使溶液以一個合適的速度被吸走,速度過快容易造成磁珠的流失。
7、用手動連續分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前檢查是否已加入無水乙醇),之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘。
8、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
9、重復步驟7-8。
10、用手動連續分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前檢查是否已加入無水乙醇),之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻3分鐘。
11、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
12、重復步驟10-11。
13、用手動連續分液器向96孔深孔板中加入500μl無水乙醇,之后將深孔板固定于25℃、 1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻1分鐘。
14、將板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
15、保持深孔板固定于96孔板磁力架上,將深孔板倒置于干凈的吸水紙上放置2分鐘。之后將深孔板從96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上靜置5分鐘。
16、用電動連續分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB,之后將深孔板放于100℃(因該恒溫混勻儀為懸空加熱,洗脫液實際溫度在50-60℃之間)、 1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻10分鐘。
17、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘,用8通道移液器溶液轉移至96孔PCR板中蓋蓋后-20℃保存備用。
方案四(用于在96孔深孔板中從在保護液中保存的口腔拭子中提取基因組DNA)
1、將口腔拭子棉簽剪下放入96孔深孔板(簡稱“深孔板”)中并記錄每個孔中樣品名稱。
2、向加入口腔拭子的深孔板中用電動連續分液器或8通道移液器加入20μl 蛋白酶K 、300μl保護該拭子的保護液和200μl Buffer ML,之后將深孔板放于100℃(該恒溫混勻儀為懸空加熱,裂解液實際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩孵育30分鐘
3、將深孔板從恒溫混勻儀上取下,把裂解產物按照順序轉移至新的深孔板中。
4、向新的深孔板中加入310μl充分混勻的異丙醇(300μl)與Magbeads(10μl)混合物。之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混合儀上震蕩混勻5分鐘。
5、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
注意:用廢液抽吸系統去除溶液時,需將真空泵調節至較小的負壓值,使溶液以一個合適的速度被吸走,速度過快容易造成磁珠的流失。
6、用手動連續分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW1(加入前檢查是否已加入無水乙醇),之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻2分鐘。
7、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
8、重復步驟6-7。
9、用手動連續分液器向深孔板中加入500μl Buffer GW2(加入前檢查是否已加入無水乙醇),之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻3分鐘。
10、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
12、用手動連續分液器向96孔深孔板中加入500μl無水乙醇,之后將深孔板固定于25℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻1分鐘。
13、將板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘。用廢液抽吸系統或8通道移液器棄去溶液,期間避免槍頭接觸磁珠。
14、保持深孔板固定于96孔板磁力架上,將深孔板倒置于干凈的吸水紙上放置2分鐘。之后將深孔板從96孔板磁力架上取下放于100℃、1600 rpm的恒溫混勻儀上靜置5分鐘。
15、用電動連續分液器或8通道移液器向深孔板加入50-100μl Buffer EB,之后將深孔板放于100℃(因該恒溫混勻儀為懸空加熱,洗脫液實際溫度在50-60℃之間)、1600 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻10分鐘。
16、將深孔板從恒溫混勻儀上取下后放于96孔板磁力架上靜置2分鐘,用8通道移液器溶液轉移至96孔PCR板中蓋蓋后-20℃保存備用。
儲存條件:室溫(15~30℃)
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