卵形瘧原蟲單重?zé)晒釶CR檢測試劑由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多卵形瘧原蟲單重?zé)晒釶CR檢測試劑等細菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括卵形瘧原蟲單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：卵形瘧原蟲單重?zé)晒釶CR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA126
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對卵形瘧原蟲特異性引物，結(jié)合一條特異性熒光探針，用熒光PCR探針技術(shù)進行卵形瘧原蟲的檢測。

二、用途：
本試劑盒可用于卵形瘧原蟲檢測鑒定及突發(fā)公共衛(wèi)生事件的處置，還可用于卵形瘧原蟲的環(huán)境監(jiān)測、衛(wèi)生檢疫及感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)
組份 數(shù)量 規(guī)格
卵形瘧原蟲熒光PCR反應(yīng)液(qPCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(DNA Polymerase MIX) 1管 48μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
卵形瘧原蟲陽性對照(PTC) 1管 50μL/管

四、熒光PCR 儀器適用范圍
ABI 系列，Bio-Rad 系列，Roche 系列等熒光定量PCR 檢測儀等。

五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期為6 個月。

六、實驗操作步驟
6.1 標(biāo)本采集
血液： 用一次性無菌5ml 注射器抽取疑似人或動物血3-5ml，置于枸櫞酸鈉或EDTA2Na 抗凝管中，搖勻送檢。
肺臟等組織：取上述組織1g左右，置于1.5ml潔凈EP管中送檢。
乳液、體液等標(biāo)本：取相應(yīng)標(biāo)本3-5ml，轉(zhuǎn)至1.5ml潔凈EP管中送檢。
6.2 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。
血液樣本：直接取200μl 抗凝血，轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml 離心管中，加入1ml 雙蒸水，劇烈震蕩30s，8000rpm 離心5min，棄上清，至無明顯紅色沉淀。(若沉淀明顯，請再重復(fù)上述步驟一次)。加入1ml生理鹽水，劇烈震蕩15s，13000rpm 離心5min，棄上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl 進行PCR 反應(yīng)。
肺、淋巴結(jié)等固體組織：剪取約0.1g 組織，用生理鹽水洗去血污，剪碎加入0.5mL TE 轉(zhuǎn)移到勻漿器中勻漿。將勻漿液50μl 轉(zhuǎn)移到1.5mL 離心管中，加入50μl 核酸提取液(使用前請室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl 進行PCR 反應(yīng)。
乳液等液體標(biāo)本：取標(biāo)本2-3mL，13000rpm 離心3min，棄上清，沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻，100℃恒溫10min，13000rpm 離心3min，取上清4μl進行PCR 反應(yīng)。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL 加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 PCR 擴增
從試劑盒中取出熒光PCR 反應(yīng)液(卵形瘧原蟲-qPCR MIX)、酶混合物(DNA Polymerase MIX)，室溫融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合液 1μL N×1μL
總量 15μL N×15μL
計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設(shè)定的N 個PCR 反應(yīng)管中分別加入15μL，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(PTC)5μL，10000rpm 瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準(zhǔn)。
8.2 試驗成立判定
陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴增曲線。
陽性對照(PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明卵形瘧原蟲核酸陽性。
Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明卵形瘧原蟲核酸陰性。
如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行卵形瘧原蟲real time PCR檢測。如果重復(fù)擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明卵形瘧原蟲核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
(1)初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
(3)PCR操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR 擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。


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貨號：SYA072
規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
本試劑盒用一對副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

二、用途：
該試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)，用于副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素(TRH)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)

組份	數(shù)量	規(guī)格
TRH反應(yīng)液(TRH-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
TRH陽性對照(TRH -PTC)	1管	50μL/管

四、熒光PCR 儀器適用范圍
ABI 系列、MJ 系列、Roche 系列，博日系列及其他熒光定量PCR 檢測儀。

五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6 個月。

六、樣品采集、前處理與DNA 提取
6.1 樣品采集
水樣便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣本前處理：
水樣便13000rpm離心2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的(DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)，并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。
對上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。
由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR 反應(yīng)液(TRH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設(shè)所需要的PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	每個反應(yīng)加入的量	N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N 個PCR 反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(TRH-PTC)5μL，10000rpm 瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入實時熒光PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預(yù)變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設(shè)定
直接讀取檢測結(jié)果?；€和閾值設(shè)定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準(zhǔn)。
8.2 試驗成立判定
(1)陰性對照(NTC)：不應(yīng)產(chǎn)生任何的擴增曲線。
(2)陽性對照(TRH-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
(3)以上條件應(yīng)同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1)在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素核酸陽性。
(2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素核酸陰性。
(3)如果Ct值>35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4)對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素qPCR檢測。如果重復(fù)擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明副溶血性弧菌耐熱相關(guān)溶血素核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
(1)初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴(yán)格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應(yīng)高壓滅菌，而且必須不含DNA 酶。
(3)PCR 操作應(yīng)嚴(yán)格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標(biāo)本處理區(qū)、PCR 擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》進行處理。

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