HR0265-50mL IP細(xì)胞裂解液
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0265-50mL IP細(xì)胞裂解液
- 型 號：HR0265-50mL
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1253
IP組織細(xì)胞蛋白裂解液是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞和組織的裂解液。能裂解細(xì)胞并充分釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能。...
IP細(xì)胞裂解液
產(chǎn)品編號：HR0265
產(chǎn)品組成：
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組份 |
50mL |
100mL |
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組分A：IP蛋白裂解液 |
50mL |
100mL |
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組分B：蛋白酶抑制劑混合物 |
200μL |
400μL |
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說明書 |
1份 |
1份 |
儲存條件：
裂解液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存，有效期1年。
產(chǎn)品簡介：
IP組織細(xì)胞蛋白裂解液是一種在非變性條件下裂解細(xì)胞和組織的裂解液。能裂解細(xì)胞并充分釋放胞漿蛋白和可溶性膜蛋白、核蛋白。裂解蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白的特性和功能。
本裂解液裂解的細(xì)胞和組織樣本，主要用于免疫沉淀和免疫共沉淀等。
本裂解液不含有離子型去垢劑組分，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白之間原有的相互作用的破壞，提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白，下游應(yīng)用范圍廣，提取液裂解細(xì)胞的能力較溫和，需要根據(jù)實(shí)際樣本情況優(yōu)化裂解時間。
IP細(xì)胞裂解液適用樣本：
● 細(xì)胞 ● 組織
產(chǎn)品特點(diǎn)：
● 使用方便，從細(xì)胞，組織提取蛋白不需經(jīng)過研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。
● 提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
● 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
● 總蛋白提取液含多種有效成分，可充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。
● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 離心機(jī) ● 振蕩器 ● 勻漿機(jī)/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液
● 蛋白定量試劑盒
注意事項(xiàng)：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
● 如果試劑盒不能短時間內(nèi)用完，蛋白酶抑混合物不可以一次加入提取液。
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
使用方法：
A、細(xì)胞裂解
1、裂解液制備：
每1mL冷的IP蛋白裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑。
● 蛋白樣品用于測定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。
2、取5-10×106個細(xì)胞，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
【注】：
● 細(xì)胞可以收集后裂解，也可以直接原位裂解，根據(jù)操作習(xí)慣選擇。
3、用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4、每5×106個細(xì)胞中加入500μL冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
【注】：
● 每106個細(xì)胞，大約10mg或10μL沉淀，加入100μL裂解液。大約相當(dāng)于6孔板的每孔加入100μL-150μL，或1個75cm2培養(yǎng)瓶加1mL。裂解液和細(xì)胞應(yīng)充分接觸。如果裂解液不足量，細(xì)胞裂解效率將會降低。
5、在4℃，12000-14000×g條件下離心15分鐘。
6、快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，用于下游實(shí)驗(yàn)。
B、組織裂解
1、裂解液制備：
每1mL冷的IP蛋白裂解液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑。
● 蛋白樣品用于測定某些細(xì)胞內(nèi)蛋白酶、磷酸酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。
2、取100mg組織樣本用手術(shù)剪刀剪碎，加入1mL裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
【注】：
● 如果組織樣品很細(xì)小，可剪碎后直接加入提取液振蕩15分鐘，可以不用勻漿器。
● 一般按組織：提取液用量1:10（w/v）左右加入提取液即可。如果需要提高得到的蛋白樣品濃度，可以將組織：提取液用量比例調(diào)整為1:5.
● 也可用液氮研磨的方法。
3、將組織勻漿液在4℃振蕩15-25分鐘。
4、在4℃，12000-14000×g條件下離心15分鐘。
5、快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，用于下游實(shí)驗(yàn)。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?
【注】：
● 建議用BCA法進(jìn)行蛋白定量。
● 蛋白蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。
IP細(xì)胞裂解液常見問題分析：
● 蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全,導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。最好在持續(xù)振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
● 細(xì)胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨(dú)特的保護(hù)蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應(yīng)用范圍廣。適當(dāng)延長裂解的時間即可。
● 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因?yàn)樵噭〢中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進(jìn)行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
● 提取時出現(xiàn)膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產(chǎn)物中有時會出現(xiàn)少量透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)即可；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10秒間隔10秒,超聲3分鐘,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,不必進(jìn)行超聲處理。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結(jié)構(gòu)，沒有對蛋白質(zhì)之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構(gòu)象和活性。
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