HR8205-50T 外泌體提取試劑盒(血清/血漿)
- 產品/服務：HR8205-50T 外泌體提取試劑盒(血清/血漿)
- 型 號：HR8205-50T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1020
本試劑盒按每個樣本處理2mL血清/血漿計,每個50T試劑盒大約可以用于提取100mL血清/血漿。如果需要處理大量的血清/血漿,將提取液按說明書標準操作的體積等比例調整即可。...
外泌體提取試劑盒(血清/血漿)
產品編號：HR8205
產品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
|
組份A：外泌體提取液A |
100mL |
200mL |
|
組份B：外泌體提取液B |
50mL |
100mL |
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組份C：外泌體保存液C |
10mL |
20mL |
儲存條件：
2-8℃保存。有效期1年。
【注】：
低溫有沉淀析出的話可以在37℃短時間水浴溶解，搖勻后使用。
使用限制：本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
外泌體提取試劑盒(血清/血漿)產品簡介：
總外泌體(Exosomes)提取試劑盒(血清/血漿用)適用于從各種血清/血漿樣品中提取總外泌體。不需要超速離心,僅需通過簡單的常規離心即可從樣本中獲取大量結構完整的外泌體,具有快速簡單,提取效率高的特點,可節省更多的實驗時間和樣本。提取的外泌體可根據實驗目的用于后續的多種實驗,應用范圍廣泛。
外泌體是活細胞分泌的來源于晚期核內體(也稱為多囊泡體)的膜性小囊泡,直徑約為30-150nm,天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各種體液中,研究發現,Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質、mRNA和microRNA,并且exosome能夠通過生物屏障,在細胞間傳遞功能性核酸分子,從而發揮各種生物學功能。
外泌體囊泡已經成為細胞間通訊的重要介質,參與原核生物和高等真核生物細胞之間的生物信號傳遞,以調節不同范圍的生物過程。外泌體囊泡的病理生理作用開始在包括癌癥、感染性疾病和神經變性疾病在內的疾病中得到充分認識,顯現了外泌體作為疾病的早期診斷、治療干預的潛在新靶點的巨大應用前景。此外,未修飾和工程化的外泌體囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應用價值。
傳統的血清/血漿中分離和提取exosome的主要方法是超速離心法,這種方法缺點是耗時耗力,往往需要30-70個小時,每次最多只能處理6個樣品,需要大量的起始材料,而且產量不高。本試劑盒提取的外泌體完好無缺,能用于各種功能研究、蛋白分析及RNA分析等下游應用實驗。
本試劑盒按每個樣本處理2mL血清/血漿計,每個50T試劑盒大約可以用于提取100mL血清/血漿。如果需要處理大量的血清/血漿,將提取液按說明書標準操作的體積等比例調整即可。
產品特點：
● 使用方便,無需超速離心,省時省力；
● 純度高,富集量大,應用范圍廣；
● 獲取的Exosome結構和功能完整；
● 穩定性好,便于運輸,便于保存。
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝試劑開蓋前請短暫離心,避免開蓋時試劑損失。
● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑。
● 以下以2mL血清/血漿為例,實際操作時按血清樣本和提取液用量體積比等比例調整使用即可。
● 不同血清/血漿樣本外泌體數量差異極大,請根據實際情況選擇血清/血漿樣本量,根據下游應用和參考文獻確定。條件允許情況下采用盡可能多的樣本。
● 常規的血清/血漿樣本最佳培養上清上樣量為5-10mL及以上,條件允許的情況下采用盡可能多的血清/血漿樣本。
● 已經分離好的外泌體樣本如果需要進行電鏡觀察,只能冰上或4℃保存,存放時間不超過兩天,注意不可冷凍保存,否則可能會影響電鏡觀察效果。
外泌體提取試劑盒(血清/血漿)操作步驟：
1、收集2mL待提取的血清/血漿樣品,置2-8℃保存。
【注】：
● 凍存樣品解凍后置2-8℃保存。
2、將樣品在4℃條件下,3000×g離心15分鐘。棄沉淀,收集上清。
3、小心將上清移入另一干凈離心管中。
4、將樣品在4℃條件下,10000×g離心20分鐘。棄沉淀,收集上清。
5、小心將上清移入另一干凈離心管中。
6、在2mL血清/血漿樣品中加入2mL提取液A,蓋緊離心管蓋,上下顛倒混勻1分鐘左右,使液體充分混勻。
7、在4mL液體樣品中加入1mL提取液B,蓋緊離心管蓋,上下顛倒混勻1分鐘左右,使液體充分混勻。
【注】：
● 試劑B使用前請充分混勻。
8、置2-8℃冰箱靜置過夜。
【注】：
● 靜置保存時間不少于10小時。
9、在4℃條件下,10000×g離心60分鐘。
10、小心移除上清,收集沉淀。
【注】：
● 盡可能吸干上清。
● 吸取時小心,防止吸掉沉淀。
11、取50-100μL外泌體保存液將沉淀重懸,即得到外泌體樣品。
【注】：
● 可以不用試劑盒中的外泌體保存液試劑C,根據下游實驗需要用自己的其它緩沖液重懸保存外泌體。
● 也可直接用于蛋白提取。
● 血漿和血清樣本的外泌體提取會得到較多的膠狀沉淀，可以延長移液器吹打混勻時間或者渦旋振蕩時間至完全溶解為止。
● 膠狀沉淀難溶解可以適當增加保存液的用量。
12、將外泌體樣本-80℃保存或直接用于下游應用。
【注】：
● 外泌體短期保存置于2-8℃保存即可,一周以上長期不用時置-80℃保存。
● 保存前可以用0.22μm過濾除菌。
常見問題分析：
● 采用血漿(plasma)還是血清(serum)來源的外泌體？
對于大多數涉及到Exosome RNA分離的研究,我們推薦使用血漿(plasma)。因為血清收集后在凝血過程中,血小板受到刺激會產生許多Exosome和其他形式的小泡,因此血清中獲得的小泡始終比血漿中多,甚至超過50%小泡來源于血小板。所以血漿是研究病理生理狀態下Exosome更好的介質。多數的criculating Exosome研究樣本使用的是血漿。負壓采血之后,血液首先存放入采血管,去除止血帶,最初的幾毫升不要,因為有壓力激活效應,并且被成纖維細胞污染。血液收集應該輕柔并且迅速。顛倒混勻采血管8-10次,與管壁上的抗凝劑混合,但不要為了抗凝而劇烈搖動。離心前管子應該垂直存放,并記錄實驗室中存放的時間,因為從采血到離心除去細胞和血小板這中間的過程很重要,建議在30min內完成,長時間存放,而沒有及時處理會導致血小板細胞Exosome的進一步釋放。血液要盡快處理,在室溫條件下分離血漿(或者血清)。所有樣品要使用相同的轉速和轉子類型離心。
● 怎樣選擇抗凝劑？
抗凝劑有一個或多個形式的功能,包括螯合鈣、蛋白酶抑制和抑制血小板活化。一般選用EDTA 抗凝。其它有許多抗凝血劑可用,但不建議使用肝素抗凝劑。無論是外源性或內源性起源(例如肥大細胞),肝素會抑制下游PCR反應,因為肝素會與引物和酶競爭與核酸結合。另外,肝素可抑制Exosome與靶細胞的結合,抑制Exosome激活血小板或降低血小板激活閾值。應用肝素治療的病人也應該注意。對于珍貴樣本,可能需要從肝素化的血液樣品中提取RNA。核酸的檢測需要通過調整PCR的敏感性。另外如果Exosome相關核酸被發現只存在于Exosome內,在RNA分離之前的洗滌也可以幫助去除肝素。其它抗凝劑如EDTA、氟化鈉/草酸鉀, 或檸檬酸三鈉[加入/不加右旋糖或茶堿、腺苷和雙嘧達莫]就更復雜了,最好根據下游的試驗來指導。CTAD阻礙血小板活化和隨后的Exosome釋放。EDTA可干擾PCR反應(盡管程度低于肝素),但它的存在可能是無害的。另外,下游實驗的選擇需要考慮到抗凝劑的使用種類。不同的聚合酶對抑制劑有不同的敏感性。
● 采血管的選擇方法？
血漿采用紫蓋采血管(EDTA-K2或EDTA-K3),例如BD貨號：367841-2mL
367862-4mL 367863-6mL 366643-10mL等；血清采用黃蓋采血管(促凝管或促凝
管帶分離膠),例如BD貨號：366566-5mL 367985-10mL等。
● 如何鑒定提取的外泌體？
通常使用透射電鏡檢測(形態)、粒徑檢測(大小)、外泌體標志蛋白Western blot
檢測等方法鑒定提取的外泌體。
● 外泌體WB標志蛋白用什么？
在進行WB檢測時,通常檢測外泌體標志蛋白為CD63、CD9、CD81、TSG101、ALIX、HSP70等。
● 進行外泌體WB鑒定時有什么內參蛋白可供選擇？
沒有,該檢測屬于定性檢測。
● 蛋白濃度低？
很多細胞外泌體量不夠下游應用,在條件允許的情況請盡可能加大培養上清的上樣量。處理部分樣本時可能沒有裂解完全,導致蛋白濃度低。請選擇高質量的蛋白裂解液或蛋白提取試劑盒。
● 抽提得到的RNA濃度低？
很多細胞外泌體量不夠下游應用,條件允許情況請盡可能加大培養上清上樣量。
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