HR0332-250T Bradford蛋白定量試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0332-250T Bradford蛋白定量試劑盒
- 型 號：HR0332-250T
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1293
BCA法快速靈敏、穩(wěn)定可靠，對不同種類蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常小。BCA法測定蛋白濃度不受絕大樣品中的化學物質(zhì)的影響。在組織細胞蛋白提取過程中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑（EDTA，EGTA）、還原劑（DTT,巰基乙醇）和脂類的影響。...
Bradford蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品編號：HR0332
產(chǎn)品組成：
|
組份 |
250T |
1000T |
|
蛋白標準(5mg/mL) |
1mL |
1mL×2 |
|
2×Bradford染色液 |
25mL |
100mL |
儲存條件：
染色液2-8℃保存，蛋白標準-20℃保存，有效期1年。
Bradford蛋白定量試劑盒產(chǎn)品簡介：
Bradford法（考馬斯亮藍法），是目前靈敏度最高的蛋白質(zhì)測定法之一。當Bradford 染色液（考馬斯亮藍G250）和蛋白在酸性條件下結(jié)合時，溶液顏色由棕黑色轉(zhuǎn)為藍色，最大吸光值波長由456nm 轉(zhuǎn)至595nm，吸光值與蛋白質(zhì)的含量在一定濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，通過測定吸光值大小并對照標準蛋白的吸光值，推算出蛋白濃度，實現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速，穩(wěn)定和高靈敏度。
Bradford染色液為2倍濃縮母液，便于儲存。
Bradford法測定受樣品中去垢劑的影響，如果蛋白樣品中含有高濃度的去垢劑，可以選用BCA法的試劑盒。
BCA法快速靈敏、穩(wěn)定可靠，對不同種類蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常小。BCA法測定蛋白濃度不受絕大樣品中的化學物質(zhì)的影響。在組織細胞蛋白提取過程中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑（EDTA，EGTA）、還原劑（DTT,巰基乙醇）和脂類的影響。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
●分光光度計 ●酶標儀 ● 移液器 ● 純水
注意事項：
● Bradford法對于去污劑敏感的，受高濃度去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60,80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用我公司的BCA蛋白濃度測定試劑盒。
● 染色液使用前請混勻。
● 將G250染色液放置到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。
● 由于Bradford法在蛋白濃度增高到一定時候，顏色反應(yīng)并不成比例增加，因此得到的標準曲線只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線，每次應(yīng)按照實際測得的標準曲線計算出相對精確的蛋白濃度。
● 反應(yīng)在5分鐘后顯色充分，但在10分鐘后可能開始出現(xiàn)沉淀，故建議在加入染色液后5-10分鐘內(nèi)完成檢測，誤差較小。
● 最好使用塑料比色皿，如使用玻璃比色皿或石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
Bradford蛋白定量試劑盒使用方法：
A、96孔酶標板測定：
1、蛋白標準工作液配制：
根據(jù)樣品數(shù)量配制相應(yīng)體積的蛋白標準工作液。將蛋白標準儲存液用雙蒸水5 倍稀釋，配成1mg/mL的工作液。
2、標準曲線繪制。
取一塊酶標板，按以下表格數(shù)據(jù)加入試劑：
|
孔號 |
0 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
|
蛋白標準（μL） |
0 |
1 |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
|
純水（μL） |
100 |
99 |
98 |
96 |
94 |
92 |
90 |
|
2×Bradford染色液（μL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
|
對應(yīng)的蛋白含量（μg） |
0 |
1 |
2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
3、振蕩混勻后，室溫放置5-10分鐘。
4、用酶標儀測定A595，以不含BSA的光吸收值為空白對照。
5、以蛋白含量（μg）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線。
6、樣品測定：
將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當濃度，取10μL樣品，加入100μL 2×Bradford染色液和90μL的純水，混勻后放置5-10分鐘，然后以0號孔為對照，測定樣品吸收值A(chǔ)595。
【注】：
● 必須用純水補足體積，不能用PBS等buffer。
7、根據(jù)測得的吸收值，在標準曲線上即可查得樣品的蛋白含量。
8、計算蛋白濃度：
以查得的蛋白含量除以樣品體積10μL，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得到待測樣品的實際濃度。
B、比色皿測定
按照比色皿規(guī)格，與以上方法相同，適當按比例增加各溶液體積即可。
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