HR8632-500μL 細胞質染色試劑CDCFDA
- 產品/服務：HR8632-500μL 細胞質染色試劑CDCFDA
- 型 號：HR8632-500μL
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-28
- 有效期至：長期有效
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CDCFDA的膜轉運和細胞內水解的精確動力學與細胞功能有關，因此CDCFDA標記可用于通過流式細胞術或熒光顯微鏡監測細胞。CDCFDA染料標記細胞的熒光強度在細胞系之間差異很大，可能是由于細胞內酯酶活性的差異導致。...
細胞質染色試劑CDCFDA
產品編號：HR8632
產品組成：
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組份 |
500μL |
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CDCFDA熒光探針 |
500μL |
儲存條件：
染料長期不用可以-20℃避光保存。避免反復凍融。有效期6個月。
【注】：
● CDCFDA探針在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
● 冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
細胞質染色試劑CDCFDA產品簡介：
CDCFDA是一種帶有琥珀酰亞胺的熒光染料，可以結合細胞內的蛋白質，對活細胞質進行熒光標記的新型染料。CDCFDA在結構上將酚羥基部位改造成AM體，所以自身不發熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，進入細胞內的CDCFDA的AM部位能被細胞內酯酶水解生成熒光產物，通過共價結合賴氨酸側鏈的氨基而摻入細胞內和細胞表面的蛋白，且結合后發出強的綠色熒光。CDCFDA的琥珀酰亞胺和細胞內蛋白質的氨基部位結合，固定在細胞內，不會漏出細胞外。
在細胞分裂增殖過程中，CDCFDA熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。而且這種熒光產物能夠很好的保持，并且可以用乙醛固定，不會重新泄漏到胞外。
CDCFDA的膜轉運和細胞內水解的精確動力學與細胞功能有關，因此CDCFDA標記可用于通過流式細胞術或熒光顯微鏡監測細胞。CDCFDA染料標記細胞的熒光強度在細胞系之間差異很大，可能是由于細胞內酯酶活性的差異導致。
CDCFDA標記細胞的熒光非常均一，優于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CDCFDA標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1 通道）根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數的細胞。CDCFDA可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CDCFDA標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CDCFDA的優點在于染色更均勻，因此比起核酸染料，它在區分父子代細胞方面效率更高更準確，比如利用流式細胞術，您可以輕易區分8-10代淋巴細胞。
CDCFDA標記的細胞用于體內觀察可以長達數周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。CDCFDA毒性小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準確和更安全地得到想要的實驗數據。
CDCFDA標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。最常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK 細胞等其它細胞的增殖檢測。
CDCFDA標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=496nm, λem=526nm。流式檢測時的激發波長可以選擇488nm，此時的發射波長為526nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CDCFDA標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。。
細胞質染色試劑CDCFDA檢測方法：
● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 離心機 ● PBS緩沖液 ● HBSS(無酚紅)
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 染色濃度根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。
● CDCFDA母液易水解，建議分裝保存，分裝后用封口膜密封管口，再用錫箔紙包裹，最后和干燥劑一起用塑料袋密封，≦-20℃冷凍保存。
● CDCFDA工作液應現配現用，不能提前配制，因為CDCFDA吸水會分解，影響染色效果。
● CDCFDA易被水解，在水溶液中會變質。母液請在使用過程中避免接觸水。工作液在標記細胞的過程中和水接觸是在許可的時間范圍內的。
● CDCFDA溶解液在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
● CDCFDA標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞，最佳標記時間需自行摸索。正式實驗前，建議先做幾個孔摸索染色濃度和加入CDCFDA試劑后的培養時間。
● 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
● 以下染色步驟僅供參考。以實際需要使用。也可以原位染色。
使用方法：
1、根據需要檢測的細胞樣品數，用HBSS緩沖液將CDCFDA母液500-4000倍稀釋。
不同的細胞需要根據預實驗結果確定最佳染色濃度。如果熒光強度弱，可以適當提高CDCFDA的終濃度。如果背景太高，可以適當降低CDCFDA的終濃度，請摸索條件找到最佳濃度。
【注】：
● 也可以用PBS 等緩沖液或相應的無血清培養基稀釋染料母液至所需濃度。
● 開始實驗前，使用HBSS 緩沖液或無血清培養基稀釋CDCFDA到需要的工作濃度。工作濃度為根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，一般染色終濃度500-4000倍稀釋。
● 一般起始濃度按500-1000倍稀釋即可。
● 為了降低過度加載染料導致的潛在背景和細胞毒性，在不影響實驗結果的前提下應盡可能低濃度染色。
● 工作液現配現用。
2、將待測細胞用染色工作液重懸，至細胞濃度大約107/mL。
【注】：
● 貼壁細胞也可原位染色。
3、在37℃培養箱中避光孵育15-30分鐘。
4、離心后去上清，收集細胞，用PBS或無血清培養基洗滌細胞1-2次，最后加入PBS或無血清培養基重懸細胞。
5、取500μL細胞懸液，用激光共聚焦/流式細胞儀檢測。激發波長為488 nm，最大發射波長為526 nm。
可以在熒光顯微鏡下直接觀察標記效果，也可以在培養適當時間后再用流式細胞儀檢測細胞，或用于其他特定實驗目的的細胞熒光示蹤。標記的細胞也可以用于活體動物的移植，并用熒光進行示蹤。標記的細胞呈綠色熒光。
6、隨后還可按照細胞的正常培養方法進行培養。
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