HR8193 微藻細胞核提取試劑盒
- 產品/服務：HR8193 微藻細胞核提取試劑盒
- 型 號：HR8193
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-24
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1119
本試劑盒適用于常見的各種綠藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等單細胞、多細胞、絲狀體、多核體等形態真核類藻類。配合適當方法調整，也可以用于藍藻等原核藻類的細胞器提取。...
微藻細胞核提取試劑盒
產品編號：HR8193
產品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
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組份A：微藻核提取液A |
25mL |
50mL |
|
組份B：微藻核提取液B |
500μL |
1mL |
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組份C：微藻核提取液C |
50mL |
100mL |
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組份D：微藻核提取液D |
25mL |
50mL |
微藻細胞核提取試劑盒儲存條件：
提取液A、C、D 2-8℃保存；提取液B -20℃保存。有效期1年。
產品簡介：
微藻細胞核提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種真核類微藻中提取細胞核。此試劑盒提供了一個系統，維持核組分是分開和完整的。優化的試劑配方和程序可以快速分離胞核，而絕少交叉污染。
本試劑盒適用于常見的各種綠藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等單細胞、多細胞、絲狀體、多核體等形態真核類藻類。配合適當方法調整，也可以用于藍藻等原核藻類的細胞器提取。
本試劑盒提取的胞核組分仍保持其生化功能，適合各種下游分析如核蛋白提取、轉錄活性，RNA拼接，gel－shift分析，報告分析，酶活性分析和WB等。
試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：
● 移液器 ● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS ● β-巰基乙醇（備選）
注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 離心機轉速有相對離心力（RCF，×g）和每分鐘轉速（RPM）兩種表示方式，有些離心機設置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算：
g=r×1.118×10-5×rpm2（r為有效離心半徑，即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度，單位為厘米) 例如: 轉速為3000rpm，有效離心半徑為10 cm，則相對離心力（RCF，×g）為=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
微藻細胞核提取試劑盒使用方法：
1、提取液制備：
每500μL冷的提取液A中加入10μL提取液B，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備提取液，提取液B不可以一次全部加入提取液A。
● 以下步驟使用到的提取液A為此步驟配制好的提取液A。
2、取培養好的微藻樣品，1000×g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。
3、用PBS洗滌微藻細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4、每300μL體積或300mg濕重微藻細胞沉淀物中加入500μL酵母提取液D，混勻后，在30℃條件下保溫15分鐘。
【注】：
● 微藻數量根據實驗情況調整，每次的提取液用量并不是一定的，請根據實際情況調整。
● 在處理有些微藻樣本時，在試劑D中加入終濃度0.2%的β-巰基乙醇有利于提高微藻細胞的得率。（選作，可不加）
5、在1000×g條件下離心5-10分鐘，移除上清，收集微藻沉淀。
6、用PBS洗滌微藻細胞沉淀一次，1000×g離心5分鐘，收集細胞，洗滌后盡可能吸干上清。
7、用提取液A重懸微藻細胞。每300μL細胞（沉淀體積）中加入1ml提取液A。
8、將微藻細胞懸液置振蕩器上37℃-55℃振蕩24-72小時。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。
● 根據下游細胞核的應用選擇合適的溫度，最佳溫度為55℃，對細胞核各種蛋白活性要求較高的實驗可以用較低溫度，使用37℃至室溫，適當延長處理時間。
● 不同類型的微藻需要處理的時間差異較大。
● 部分細胞壁較厚的細胞類型可能需要處理更長時間。可以延長至72小時以上處理以提高細胞核得率。
9、離心力1000×g離心5分鐘，將上清移入另一離心管保存備用，收集細胞沉淀。
10、用PBS洗滌微藻細胞沉淀一次，1000×g離心5分鐘，收集細胞，洗滌后盡可能吸干上清。
11、在微藻細胞沉淀中加入1ml試劑C重懸細胞，混勻。
12、將細胞懸液置振蕩器上振蕩20-30分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，室溫靜置，中間每隔幾分鐘用移液器輕輕吹打混勻即可。
13、離心力2000×g離心5分鐘，棄上清，收集沉淀。
14、用PBS洗滌沉淀1-2次。
15、沉淀即為微藻細胞核。將上述微藻細胞核沉淀用適當緩沖液重懸后2-8℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
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