HR8274 線粒體膜電位檢測試劑盒(DiOC6(3)法)
- 產品/服務：HR8274 線粒體膜電位檢測試劑盒(DiOC6(3)法)
- 型 號：HR8274
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-24
- 有效期至：長期有效
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本試劑盒可用于培養的細胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。DiOC6(3)可以快速通過細胞膜，僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲，并且對細胞沒有任何毒性。DiOC6(3)的最大激發波長為482nm，最大發射波長為500nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現黃綠色熒光。...
線粒體膜電位檢測試劑盒(DiOC6(3)法)
產品編號：HR8274
產品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
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組份A：DiOC6(3)探針 |
250μL |
500μL |
|
組份B：探針稀釋液 |
5mL |
10mL |
儲存條件：
DiOC6(3)探針 -20℃避光保存,避免反復凍融。稀釋液2-8℃保存。有效期6個月。
【注】：
● 探針短期2周內可以2-8℃保存。染料長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。
● 探針液A為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
線粒體膜電位檢測試劑盒(DiOC6(3)法)產品簡介：
線粒體膜電位的下降是細胞凋亡早期的一個標志性事件。DiOC6(3)是一種可以通透細胞膜的選擇性染色活細胞線粒體的熒光染料，可以用作檢測線粒體膜電位(mitocho
DiOC6(3)是親脂性熒光染料，其在水溶液中時熒光較弱，與脂質結合后熒光大幅度增強。在正常細胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進入線粒體內膜。在細胞凋亡發生時，線粒體膜完整性破壞，線粒體膜通透性轉運孔開放，引起線粒體跨膜電位(ΔΨm)的崩潰，DiOC6(3)重新釋放出線粒體膜。通過熒光信號的強弱來檢測線粒體膜電位的變化。
本試劑盒可用于培養的細胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。
DiOC6(3)可以快速通過細胞膜，僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲，并且對細胞沒有任何毒性。DiOC6(3)的最大激發波長為482nm，最大發射波長為500nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現黃綠色熒光。
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 流式細胞儀 ● PBS或者HBSS（無酚紅）
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● 始終保持平衡染液中pH值的一致性，因為pH值的變化將影響膜電位。
● 根椐細胞種類、實驗條件不同流式細胞儀設置不同。
線粒體膜電位檢測試劑盒(DiOC6(3)法)使用方法：
懸浮細胞
1、試劑配制：
根據樣本數量，用37℃培養箱預熱染料稀釋液試劑B將DiOC6(3)熒光染料10倍稀釋。再用HBSS或相應的無血清培養基或其他緩沖液將探針DiOC6(3)進行25000倍稀釋，配制成染色工作液。
【注】：
● 也可以不使用本試劑盒中的試劑B，直接用HBSS等緩沖液或相應的無血清培養基稀釋DiOC6(3)染料至所需濃度。
● 開始實驗前，使用HBSS緩沖液或無血清培養基稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度下進行測試。一般染色終濃度為試劑盒中染料母液的200000-250000倍稀釋，250000倍適合大多數細胞樣本。
● 建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩定。
● 工作液現配現用。
● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
● 若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，熒光信號會衰減。
2、收集樣本細胞以及陰性、陽性對照細胞。
3、用PBS洗滌細胞兩次。離心收集細胞。
【注】：
● 300×g -500×g，2-8℃，離心時間5分鐘收集細胞。
4、用500μL DiOC6(3)染色工作液將細胞重懸，細胞密度約5-10×105個/ml。37℃，5% CO2的培養箱中孵育15-30分鐘。
5、常溫離心收集細胞。用PBS洗滌細胞2次。
【注】：
● 300×g -500×g，離心時間5分鐘收集細胞。
6、用500μL預熱的HBSS或PBS緩沖液將細胞重懸。
7、用流式細胞儀或熒光酶標儀/分光光度計檢測分析結果，或者用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察結果。
貼壁細胞
對于貼壁細胞，可以先收集細胞，重懸后參考懸浮細胞的檢測方法。
純化線粒體
1、把配制好的DIOC6(3)染色工作液再用DIOC6(3)孵育緩沖液(1×)稀釋5倍。
2、0.9mL 5倍稀釋的DIOC6(3)染色工作液中加入0.1mL總蛋白量為10～100μg的純化的線粒體。
3、結果檢測。
組織樣本
組織樣本可以用玻璃勻漿器勻漿成單細胞懸液后按照細胞樣本的方法檢測。也可以用其他細胞懸液制備的試劑盒處理組織后檢測。
結果分析：
檢測時可以把激發光設置為488nm，發射光設置為500nm。
線粒體膜電位降低，熒光強度減弱。
用流式細胞儀檢測細胞線粒體膜電位的情況。
也可以用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察；用熒光分光光度計或熒光酶標儀檢測。
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