HR8062 植物核蛋白/胞質蛋白提取試劑盒(酶法)
- 產品/服務：HR8062 植物核蛋白/胞質蛋白提取試劑盒(酶法)
- 型 號：HR8062
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-24
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：878
酶法的提取試劑盒，提取過程簡單方便，速度快，可在1 小時內完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒（相關產品HR0137），對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據實際需要選擇試劑盒。...
植物核蛋白/胞質蛋白提取試劑盒(酶法)
產品編號：HR8062
產品組成：
|
組份 |
50T |
100T |
|
組份A：植物核蛋白提取液A |
25mL |
50mL |
|
組份B：植物核蛋白提取液B |
25mL |
50mL |
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組份C：植物核蛋白提取液C |
10mL |
20mL |
|
組份D：植物胞質蛋白提取液D |
2.5mL |
5mL |
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組份E：蛋白酶抑制劑混合物 |
250μL |
500μL |
保存條件：
蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。
【注】：
● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
產品簡介：
植物核蛋白和細胞質蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白和其它細胞質蛋白。
本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解植物膜組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。
本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。
本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。
本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
本試劑盒采用酶法提取，制備的蛋白回收率比非酶法有提高，純度高，保持天然活性，而且很少交叉污染。但是酶法提取耗時較長，如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非
酶法的提取試劑盒，提取過程簡單方便，速度快，可在1 小時內完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒（相關產品HR0137），對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據實際需要選擇試劑盒。
本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產品HR0389）。
產品特點：
● 使用方便。
● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
植物核蛋白/胞質蛋白提取試劑盒(酶法)試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器
● 100μm細胞篩 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒
使用注意事項：
● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。。
植物核蛋白/胞質蛋白提取試劑盒(酶法)使用方法：
1、提取液制備：
每500μL預冷的蛋白提取液B中加入2μL蛋白酶抑制劑；每200μL蛋白提取液C中分別加入1μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
【注】：
● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。
2、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的100-200mg新鮮植物葉片組織樣本用手術剪刀或鋒利的刀片剪切碎，切成0.5mm*0.5mm細塊，加入500μL提取液A，充分混勻。
3、將懸液置振蕩器上室溫振蕩12-72小時。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，保證提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時用移液器輕輕吹打混勻即可。
● 不同類型的植物樣本需要處理的時間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時間短。
● 部分細胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長時間。可以延長至72小時以上處理以提高得率。
4、在1000×g條件下離心5-10分鐘，棄上清，收集沉淀。
【注】：
● 有條件可以用100μm細胞篩網過濾提取液處理液后，收集濾液再離心。
● 沒有細胞篩可以不過濾。
5、在沉淀中加入500μL提取液B，充分混勻。用勻漿機/Dounce勻漿器充分勻漿。
【注】：
● 沒有Dounce勻漿器，也可用勻漿機充分勻漿或者。
● 沒有勻漿器，置振蕩器振蕩20-30分鐘。
6、將勻漿液在800×g離心5分鐘。
7、收集沉淀I，將上清II移入另一干凈的離心管。
8、在沉淀I中加入100-200μL冷的提取液C，高速渦旋5秒，充分混勻。
9、置4℃振蕩20-40分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
10、在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
11、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到核蛋白。
12、在步驟7中的上清II中加入50μL胞質提取液D，高速渦旋振蕩10秒，充分混勻。
13、置4℃振蕩10分鐘。
【注】：
● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。
● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。
14、在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。
15、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到細胞質蛋白。
16、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
【注】：
● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。
● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。
常見問題分析：
● 蛋白濃度低？
植物核蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，盡可能增加樣本量。
處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當增加試劑B的勻漿次數，并適當延長試劑A和C的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
● 用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
● 提取時出現膠狀沉淀？
蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。
● 提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。
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