HR8369 Ca2+鈣離子染色試劑盒(CF9綠色熒光)
- 產品/服務：HR8369 Ca2+鈣離子染色試劑盒(CF9綠色熒光)
- 型 號：HR8369
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-21
- 有效期至：長期有效
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本試劑盒中的CF9細胞內鈣離子染色探針為紫外激發的探針，具有480/400nm的雙發射波長。CF9具有極高的細胞滲透性，經過簡單孵育即可實現細胞加載。...
Ca2+鈣離子染色試劑盒(CF9綠色熒光)
產品編號：HR8369
產品組成：
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組份 |
50-500T |
100-1000T |
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試劑A：CF9鈣離子染料 |
50μL |
50μL×2 |
儲存條件：
染料-20℃避光保存，有效期6個月。
【注】：
● 染料短期2周內可以2-8℃保存,長期不用可以-20℃保存,避免反復凍融。
● 染色液A為DMSO溶液,冬季氣溫較低時為凝固狀態,極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴,吸頭也需要放在培養箱預熱,否則容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
Ca2+鈣離子染色試劑盒(CF9綠色熒光)簡介：
本試劑盒中的CF9細胞內鈣離子染色探針為紫外激發的探針，具有480/400nm的雙發射波長。CF9具有極高的細胞滲透性，經過簡單孵育即可實現細胞加載。
穿透細胞膜進入細胞后被細胞內的酯酶剪切形成不易透過細胞膜的CF9新產物，從而被滯留在細胞內。CF9游離配體能特異性地結合Ca2+，同時可發出熒光，結合Ca2+后的最大發射波長從結合前的475nm向400nm（Ca2+飽和時）偏移。該信號變化可被流式細胞儀較好的捕捉：在氬離子激光器的351-364光譜范圍內單一波長激發該探針，在400 nm和480 nm的波長處分別檢測結合鈣離子和未結合鈣離子的熒光信號，通過二者熒光強度的比率測定鈣離子濃度。
可以使用熒光顯微鏡、酶標儀、激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞內鈣離子濃度的變化。
CF9的發射是比率的，使用流式細胞儀更適合，使用單一激光進行激發更為方便（通常是氬離子激光器的351-364 nm光譜線）。在無Ca2+環境中，CF9的發射從480nm 移至400nm（當與Ca2+結合時）。
如果需要使用熒光顯微鏡/激光共聚焦成像，可以選用激發比率的CF8探針，顯微鏡改變激發波長比發射波長更方便。在結合Ca2+后，CF8表現出吸收移位，可以通過掃描300和400nm之間的激發光譜來觀察，同時監測~510nm處的發射。
以96孔板每孔200μL染色液計，本試劑盒小包裝可以染色50-500個樣本。
檢測方法：
● 流式細胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細胞 ● 貼壁細胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
● 熒光顯微鏡/激光共聚焦/流式細胞儀 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS ● HBSS
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
● CF9染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。
● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
● 標記的條件因細胞種類而異，根據不同樣本的實際染色結果做相應調整，在每次實驗前，請先根據不同的實驗要求、細胞類型、細胞的膜通透性等進行優化，確定最佳條件。以下方法僅供參考。
● 染色后立即進行分析。
● 本染色液可用于細胞涂片、細胞的檢測。
● 可以在染色溶液中加入等體積的20% Pluro
● 由于CF9探針在水中的穩定性比較差，染色工作液必須現配現用，并且在當天用完。
● CF9探針對濕度比較敏感，每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據單次用量，分裝密封保存。不可使用含水的吸頭。
● 試劑A母液請擰緊螺旋蓋，避免受潮失效。
使用方法：
1、染色工作液的配制：
根據樣本數量，用37℃培養箱預熱的HBSS將CF9熒光染料200-1000倍稀釋，配制成染色工作液。
【注】：
● 也可以用相應的無血清培養基稀釋CF9染料至所需濃度。
● 開始實驗前，使用HBSS緩沖液或無血清培養基稀釋染料儲存液到需要的工作濃度。工作濃度應根據不同細胞的預實驗結果確定的最佳工作濃度，建議至少在超過10倍范圍的濃度
下進行測試。一般染色終濃度500-1000倍稀釋，500-1000倍適合大多數細胞樣本。
● 建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩定。
● 工作液現配現用。
● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。
● 若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，熒光信號會衰減。
2、細胞染色
Ca2+鈣離子染色試劑盒(CF9綠色熒光)懸浮細胞染色
1) 用PBS洗滌細胞2次。
【注：
● 500×g離心5分鐘。根據實驗室平時離心細胞的離心力離心。
2) 加入適量體積的染色工作液重懸細胞，使其密度大約為1×106/mL。
3) 在37℃孵育細胞 20分鐘，不同的細胞最佳培養時間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。
【注】：
● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。
4) 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS，再繼續孵育40分鐘。
5) 孵育結束，500g離心5分鐘。
【注】:
● 以下步驟均為洗滌細胞。根據實驗室平時離心細胞的離心力和時間進行離心。
6) 棄上清液，再次緩慢加入37℃預熱的HBSS 重懸細胞。
7) 重復（5），（6）步驟兩次。
8) 加入HBSS 重懸細胞，在37℃下再繼續孵育20分鐘。
9) 然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。
Ca2+鈣離子染色試劑盒(CF9綠色熒光)貼壁細胞染色
1) 用PBS洗滌細胞2次。
2) 細胞培養板中或細胞爬片上加入適量體積的染色工作液。
【注】：
● 96孔細胞培養板每孔加入100μL染色液即可。
3) 37℃孵育細胞20分鐘，不同的細胞最佳培養時間不同。可以用20分鐘作為起始孵育時間，之后優化體系以得到均一的標記結果。
【注】：
● 若染色不夠充分，建議增加染料濃度或延長染色時間。
4) 吸干染色工作液，用HBSS洗培養板或蓋玻片2～3次，每次用預熱的HBSS覆蓋所有細胞，然后吸干培養基。
5) 加入HBSS，在37℃下再繼續孵育20分鐘。
6) 然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測。
3、用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測
未結合的CF9的發射波長為480nm。結合鈣離子后，發射波長下移至400nm。
采用流式細胞術可測定其波長隨時間的變化，并以兩個發射波長的比值表示。
【注】：
● 要優化兩個發射波長比例，未結合的CF9的熒光值應使用波長大于480nm（最好選擇525nm）的濾光片采集，而已結合的CF9的熒光值應使用波長小于400nm的濾光片采集。
● 由于CF9的發射波長范圍較寬，不能使用Fluor450、eVolve605或eVolve655進行多色流式分析，但是利用488nm或633nm的熒光染料偶聯試劑與CF9完全兼容。
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