HR8685 活性氧檢測(cè)試劑盒(DHE,紅色熒光)
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR8685 活性氧檢測(cè)試劑盒(DHE,紅色熒光)
- 型 號(hào)：HR8685
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-08-21
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：878
在激發(fā)波長(zhǎng)535nm,發(fā)射波長(zhǎng)610nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)熒光,從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。...
活性氧檢測(cè)試劑盒(DHE,紅色熒光)
產(chǎn)品編號(hào)：HR8685
產(chǎn)品組成：
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組份 |
200-1000T |
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DHE熒光探針 |
200μL |
儲(chǔ)存條件：
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融；有效期6個(gè)月。
活性氧檢測(cè)試劑盒(DHE,紅色熒光)【注】：
● DHE熒光探針為DMSO溶液,冬季氣溫較低時(shí)為凝固狀態(tài),極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。
● 可用手捂住使其融解或37℃短時(shí)間水浴。吸頭也需放培養(yǎng)箱預(yù)熱,否則易再次凝固在吸頭內(nèi)壁產(chǎn)生損耗。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
活性氧檢測(cè)試劑盒(DHE,紅色熒光)是一種利用熒光探針DHE進(jìn)行活性氧檢測(cè)的試劑盒。DHE可自由透過(guò)活細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化,形成氧化乙啶；氧化乙啶可摻入染色體DNA中,產(chǎn)生紅色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中紅色熒光的產(chǎn)生,可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。二氫乙啶在細(xì)胞內(nèi)主要被超氧陰離子型ROS氧化,用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察,是一種快速簡(jiǎn)便的細(xì)胞中ROS經(jīng)典檢測(cè)方法。
在激發(fā)波長(zhǎng)535nm,發(fā)射波長(zhǎng)610nm附近,使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計(jì)、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測(cè)熒光,從而測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
● 使用方便； ● 背景低,靈敏度高； ● 線性范圍寬,使用方便。
檢測(cè)方法：
● 流式細(xì)胞儀 ● 熒光顯微鏡 ● 激光共聚焦
活性氧檢測(cè)試劑盒(DHE,紅色熒光)樣本類型：
● 懸浮細(xì)胞 ● 貼壁細(xì)胞
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計(jì)或熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀，激發(fā)波長(zhǎng)535nm,發(fā)射波長(zhǎng)610nm。
● 離心機(jī) ● 移液器 ● PBS緩沖液/HBSS（不含酚紅）
使用注意事項(xiàng)：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。
● 熒光探針標(biāo)記后,一定要洗凈殘余的未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針,否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。
● 探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后,可以進(jìn)行激發(fā)波長(zhǎng)的掃描和發(fā)射波長(zhǎng)的掃描,以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測(cè)定所用的時(shí)間,以減少各種可能的誤差。
● 對(duì)于藥物作用時(shí)間較短(2小時(shí)以內(nèi))的細(xì)胞,先標(biāo)記探針,后用藥物刺激細(xì)胞。對(duì)于藥物作用時(shí)間較長(zhǎng)(6小時(shí)以上)的細(xì)胞,先用活性氧陽(yáng)性對(duì)照誘導(dǎo)劑或相應(yīng)的藥物刺激細(xì)胞,后標(biāo)記探針。
● DHE在光照和空氣中易被氧化,注意避光密封保存。
● 對(duì)不同的細(xì)胞,應(yīng)選擇合適的孵育時(shí)間和濃度,以觀察ROS的變化。
使用方法：
DHE探針配制：
DHE探針可在新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基、各種緩沖鹽溶液中稀釋到所需濃度，1000-10000倍稀釋,以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)基；也可直接向細(xì)胞培養(yǎng)基中加入DHE探針溶液至所需濃度。
【注】：
● 開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前,使用HBSS緩沖液或無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋染料儲(chǔ)存液到需要的工作濃度。工作濃度應(yīng)根據(jù)不同細(xì)胞的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的最佳工作濃度,建議至少在超過(guò)10倍范圍的濃度下進(jìn)行測(cè)試。一般染色終濃度1000-10000倍稀釋,1000-2000倍適合大多數(shù)細(xì)胞樣本。
● 建議收到產(chǎn)品后,根據(jù)單次使用量,對(duì)母液進(jìn)行小量分裝,每次使用一管,試劑-20℃避光凍存,一年穩(wěn)定。
● 工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。
2、依據(jù)細(xì)胞ROS含量的不同,DHE終濃度可選擇在1000-10000倍稀釋的范圍,孵育時(shí)間可選擇10-90分鐘,在37℃或室溫進(jìn)行避光孵育。
DHE探針標(biāo)記：
原位標(biāo)記：僅適用于貼壁培養(yǎng)細(xì)胞。
1、按照1:1000-2000用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DHE探針。
【注】：
● 不能用含有血清的培養(yǎng)基稀釋DHE探針。
● 也可以用HBSS緩沖液稀釋探針。
2、去除細(xì)胞培養(yǎng)基,用PBS洗細(xì)胞一次。
3、加入適當(dāng)體積稀釋好的DHE探針。加入的體積以能充分蓋住細(xì)胞為宜,通常對(duì)于96孔板每孔加入100-200μL染色液；六孔板的一個(gè)孔加入稀釋好的DHE探針不少于1mL。
4、在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育10-60分鐘。
5、用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次,以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DHE探針。
【注】：
● 也可以用HBSS/PBS洗滌細(xì)胞。
收集后標(biāo)記：懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞消化處理
1、按照1:1000用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋DHE探針。
【注】：
● 不能用含有血清的培養(yǎng)基稀釋DHE探針。
● 也可以用HBSS緩沖液稀釋探針。
1、離心移除培養(yǎng)基,用PBS洗細(xì)胞一次。
2、細(xì)胞收集后懸浮于稀釋好的DHE探針中,細(xì)胞濃度為1×106-2×107/ml,37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育10-60分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細(xì)胞充分接觸。
4、用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次,以充分去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的DHE探針。
5、用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
【注】：
● 也可以用HBSS/PBS洗滌細(xì)胞。
熒光顯微鏡檢測(cè)：
1、對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,可直接在熒光顯微鏡下觀察；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,取25-50μL細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上,再蓋上一張蓋玻片。
2、熒光顯微鏡下,用藍(lán)光/綠光激發(fā),觀察和拍攝細(xì)胞紅色發(fā)射圖像,ROS陽(yáng)性細(xì)胞在整個(gè)核區(qū)被染成紅色；用紫外光激發(fā)時(shí),胞漿中未氧化的二氫乙啶可發(fā)出藍(lán)色熒光。
流式細(xì)胞儀分析：
1、對(duì)貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,用胰酶消化制備成單細(xì)胞懸液；對(duì)懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞,直接收集細(xì)胞。
用0.5～1ml冰冷PBS重懸細(xì)胞（5～10萬(wàn)）。
2、采用480～535nm波長(zhǎng)激發(fā),測(cè)定590 nm～610nm以上的發(fā)射,細(xì)胞應(yīng)可分成兩個(gè)亞群：ROS陰性細(xì)胞僅有很低的熒光強(qiáng)度,ROS陽(yáng)性細(xì)胞有較強(qiáng)的紅色熒光。
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