HR0459 Hoechst33258染色試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：HR0459 Hoechst33258染色試劑盒
- 型 號(hào)：HR0459
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-08-18
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：882
Hoechst33258染色試劑盒可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，也可用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA 染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測(cè)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。...
Hoechst33258染色試劑盒
產(chǎn)品編號(hào)：HR0459
產(chǎn)品組成：
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組份 |
100-200T |
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Hoechst 33258染色液 |
1mL |
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試劑B |
10mL |
Hoechst33258染色試劑盒儲(chǔ)存條件：
染液2-8℃避光保存。長(zhǎng)期保存-20℃避光保存。試劑B 2-8℃保存。有效期6個(gè)月。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
Hoechst33258染色試劑盒可用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，也可用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA 染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測(cè)或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。Hoechst 33258能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst 33258比正常細(xì)胞的多，熒光強(qiáng)度要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA 的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst 33258排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。Hoechst 33258的最大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后，最大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。本Hoechst 33258染色試劑盒可直接用于活細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色，也可用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。
試劑盒以外自備試劑和儀器：
● 流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 移液器 ● 離心機(jī) ● PBS或HBSS ● 4%多聚甲醛
注意事項(xiàng)：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。
● 細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
● 染色后立即進(jìn)行分析。
● 染色時(shí)間根據(jù)不同樣本的實(shí)際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。
● 本染色液可用于培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)胞涂片、石蠟切片、冰凍切片的檢測(cè)。石蠟切片用常規(guī)方法脫蠟、分化，冰凍切片用冰丙酮固定后檢測(cè)。
● 根據(jù)樣本情況和下游的檢測(cè)儀器選擇合適的染色方法，只要在染色時(shí)染色工作液能充分覆蓋細(xì)胞樣本即可。
● 活細(xì)胞原位染色可能需要較長(zhǎng)時(shí)間，可將染液加入培養(yǎng)基后避光孵育1-2小時(shí)，或更長(zhǎng)時(shí)間。
● 以下以培養(yǎng)細(xì)胞的涂片的熒光顯微鏡為例，細(xì)胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法請(qǐng)參閱相關(guān)資料。
Hoechst33258染色試劑盒使用方法：
1、染色工作液的配制：
根據(jù)樣品數(shù)用 PBS將Hoechst33258染色液10-100倍稀釋，配制成染色工作液。
2、細(xì)胞涂片的制備：
貼壁細(xì)胞，可將蓋玻片放于培養(yǎng)器皿中，讓培養(yǎng)細(xì)胞長(zhǎng)于玻片上，然后用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培養(yǎng)后收集細(xì)胞制作涂片檢測(cè)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，用藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡后，500-1000×g離心5分鐘收集細(xì)胞，用PBS洗2次，收集調(diào)整細(xì)胞數(shù)為1×105/mL，涂片或用離心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；
【注】：
● 也可不固定，直接染色，稍微延長(zhǎng)染色時(shí)間。
3、用PBS洗滌涂片兩次。
4、加適量染色工作液于涂片上，室溫避光染色5-20分鐘。
5、用純水10倍稀釋的試劑B洗滌涂片。
6、用熒光顯微鏡檢測(cè)結(jié)果。染料-DNA復(fù)合物的最大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。
結(jié)果分析：
Hoechst 33258染色后，置于熒光顯微鏡下，選用340-350nm的激發(fā)光觀察：
正常細(xì)胞的細(xì)胞核呈彌散均勻藍(lán)色熒光，凋亡細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見濃染致密的顆粒塊狀藍(lán)色熒光，顏色有些發(fā)白。如果見到3個(gè)或3個(gè)以上的DNA熒光碎片被認(rèn)為是凋亡細(xì)胞。
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