F080210 羧基化5碳鏈連接4FF瓊脂糖凝膠
- 產品/服務：F080210 羧基化5碳鏈連接4FF瓊脂糖凝膠
- 型 號：F080210
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-04-19
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1333
產品簡介
北京百奧萊博供應的羧基化5碳鏈連接4FF瓊脂糖凝膠用于科研目的，我公司的羧基化5碳鏈連接4FF瓊脂糖凝膠品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括羧基化5碳鏈連接4FF瓊脂糖凝膠在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：羧基化5碳鏈連接4FF瓊脂糖凝膠
產品貨號：F080210
產品規格：10ml|50ml
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貨號：CZ011
規格：1ml/5ml/25ml
產品簡介：
Protein A(or A/G)抗體純化磁珠系列產品是利用蛋白偶聯技術使Protein A(or A/G)共價包被到NHS活化的超順磁性微球表面。與當前免疫磁珠市場上同類產品相比，該產品具有更高的抗體結合能力和較低的蛋白非特異吸附率，洗脫條件更均一，一步純化即可從血清樣品中分離出純度大于90%的抗體。本產品為納米級磁性微球，具有比表面積，可大幅度縮短抗體吸附所需的時間，熟練操作可在15 min內完成抗體吸附過程，30 min內完成抗體純化流程。抗體純化磁珠試劑盒配有經過優化的預制緩沖液，為抗體純化實驗提供了zuì佳的反應條件，增強了抗體純化實驗的穩定性。
本產品可重復使用，適用于血漿、腹水、組織培養上清液等樣品中的抗體純化，也可用于抗體固定及其它相關研究。用戶可根據目標抗體的種屬來源及亞型選擇磁珠的類別，Protein A，Protein A/G磁珠與不同抗體的親和性比較參見附表1。
儲存條件 2～8℃保存
保質期 1年
注：磁珠結合Human IgG能力(Antibody Capacity)分別為：Protein A：1.4～1.6 mg/mL; Protein A/G：
1.8～2.0 mg/mL
操作流程：
不同種類的免疫磁珠具有不同的抗體結合能力，在執行抗體純化操作之前，操作者應先估算待純化樣品中的抗體含量(一般血清樣品中抗體含量約2～8 mg/mL，細胞培養物中抗體濃度因表達量不同而變化較大)；然后根據所選免疫磁珠的抗體結合能力(見免疫磁珠相關產品列表或者產品組成的Antibody Capacity數據)，計算免疫磁珠的大概用量，免疫磁珠用量過多或過少均影響抗體純化的效果，建議免疫磁珠用量的zuì大載量應為樣品抗體含量的80%～。
以下操作步驟按照純化抗體，取用100 μL Protein A抗體純化磁珠為例進行詳細描述。操作者可以參照以下步驟中各種緩沖液的用量及容器大小，按比例調整實際操作中各成分的用量。
樣品處理：取抗體含量約為0.1～0.15 mg的樣品置于新的1.5 mL EP管中，加入抗體結合緩沖液至總體積為500 μL(如樣品體積大于500 μL則無需加入)，混合均勻。
2. 磁珠預處理：將抗體純化磁珠漩渦振蕩30 s，使磁珠充分重懸；取100μL磁珠懸液置于另一新的1.5 mL EP管中。對磁珠懸液進行磁性分離(將EP管放置于磁性分離器)上，使磁珠吸附在管壁至溶液澄清；該操作描述以下省略，棄上清液。從磁性分離器上取下EP管。用抗體結合緩沖液洗滌2次，棄上清液，管中磁珠可直接用于抗體分離)。
3. 抗體吸附：在步驟2預處理的磁珠管中加入步驟1處理的樣品溶液，漩渦振蕩均勻，在室溫下(約25℃)置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，促使樣品和磁珠充分接觸并吸附，翻轉約15 min后進行磁性分離，移棄上清液。
4. 磁珠洗滌：向EP管中加入1 mL抗體結合緩沖液，振蕩重懸磁珠后進行磁性分離，移棄上清液；該操作重復3次。
5. 抗體洗脫(方式1-高鹽弱酸性洗脫)：
1) 抗體洗脫：在步驟4完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5～1.0 mL抗體洗脫緩沖液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下(約25℃)置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，翻轉10 min后進行磁性分離，收集上清液至新的EP管；
2) 抗體透析：因抗體洗脫緩沖液含有較高濃度的鹽分，收集的抗體溶液不能直接用于SDS-PAGE檢測，但可以用抗體洗脫緩沖液調零進行抗體濃度測定。抗體洗脫緩沖液呈偏酸性(pH4.5)，建議操作者用自行配制的中性低鹽溶液(即透析液)立即對收集的抗體溶液進行透析處理，以降低抗體失活率，獲得較高活性和穩定性的抗體溶液。
6. 抗體洗脫(方式2-低pH洗脫)：
1) 抗體洗脫：在步驟4完成磁珠洗滌的EP管中加入0.5～1.0 mL抗體洗脫緩沖液，用移液器吹打或者渦旋震蕩下迅速重懸，然后在室溫下(約25℃)置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉EP管，翻轉10 min后進行磁性分離，收集上清液至新的EP管；
2) 抗體中和：因抗體洗脫緩沖液pH值較低，收集的抗體溶液需要立即加入一定量的抗體中和緩沖液，一般為收集抗體溶液體積的1/20～1/10，zuì終使洗脫的抗體溶液pH值保持中性環境，以降低抗體失活率，獲得較高活性和穩定性的抗體溶液。收集的抗體可直接用于SDS-PAGE檢測及抗體濃度的測定。
7. 磁珠后處理：使用后的磁珠用磁珠洗滌緩沖液進行重懸，然后執行磁性分離，棄上清液，重復操作一次；加入100 μL磁珠儲存緩沖液，置于2～8℃保存。
磁珠再生：
1. 磁珠多次使用后會有沉淀蛋白、強疏水性蛋白、脂蛋白等雜質非特異性吸附到磁珠上，為了保證磁珠的使用效率，建議持續使用5次后進行磁珠再生處理。
2. 按約1 mL磁珠5 mL的比例加入磁珠再生緩沖液，振蕩均勻，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉混合，10 min后進行磁性分離，棄上清液。
3. 按約1 mL磁珠5 mL的比例加入磁珠洗滌緩沖液進行重懸，然后執行磁性分離，棄上清液，重復 以上操作兩次。
4. 按照約1 mL磁珠1 mL的比例加入適量磁珠儲存緩沖液，置于2～8℃保存。
注意事項：
1. 進行抗體純化操作之前，請務必認真閱讀本操作說明書。
2. 本產品須與磁性分離器配套使用。
3. 磁珠使用前應充分振蕩均勻。
4. 磁珠應保存在儲存溶液中，防止干燥。
5. 請勿將磁珠冷凍或離心，以免引起不可逆聚集。
6. 本產品僅供研究使用。
常見問題及解答(FAQ)：
Q1：如何提高抗體與磁珠結合效率?
A1：磁珠與抗體的結合效率與抗體的種屬來源及所屬亞型有關，請確認抗體的類型與Protein A配基的親和效率(附表1)，如抗體所屬亞型與Protein A的親和度較低，可以通過增加抗體與磁珠的孵育時間(30～120 min)、提高結合緩沖液的pH值(8～9)及降低離子強度(25～100 mM NaCl)等方法提高親和效率，或選擇與目標抗體具有更高親和度的配基(如Protein A/G)。
Q2：如何提高抗體洗脫效率？
A2：抗體與Protein A配基親和度太高導致抗體洗脫效率低，可以通過降低洗脫緩沖液的pH值(1.9～2.5)、增大洗脫緩沖液的離子強度(可選用2～3 M MgCl2)或延長洗脫時間，提高抗體的洗脫效率。但應注意抗體在低pH條件下容易形成聚集物，抗體洗脫產物應馬上用堿性緩沖劑(如Tris、HEPES等)調節pH至中性。
Q3：如何避免磁珠在儲存或使用過程中可能出現的聚集情況？
A3：磁珠應保存在2～8℃，使用時應避免由于污染而導致的不可逆聚集，或因干燥而導致的聚集。磁珠在低pH的洗脫緩沖液中發生聚集屬于正常現象，不影響磁珠的正常使用。在Binding Buffer和Elution Buffer中添加終濃度為0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可有效防止磁珠聚集。經過低pH洗脫操作的磁珠可以用結合緩沖液洗滌至中性，然后用含有0.1%(v/v)Tween-20的Tris Buffer(pH7.5)振蕩重懸磁珠，并用超聲波水浴處理2 min，即可使磁珠恢復均勻狀態，以上處理均不影響磁珠的抗體結合效率。
Q4：如何解決磁珠易粘附管壁的現象？
A4：建議使用低吸附率的耗材進行磁珠操作。另外，在緩沖液中添加0.01%～0.1%(v/v)的非離子型去垢劑(如NP-40、Tween-20或Triton X-100)可以有效降低磁珠對耗材的粘附。
Q5: 磁珠在使用過程中出現結塊現象？
A5：磁珠在使用時如果出現結塊現象一般較難振蕩打散，容易導致分布不均，出現該問題的原因是磁珠在磁場中放置太久而使磁珠牢固的結合在一起。用超聲波水浴處理2 min即可打散磁珠使其重新分散，但應注意超聲處理也會使磁珠在樣品溶液中捕獲的抗體脫落，所以磁珠在加樣后洗脫前不宜使用該方法。
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