QN4080 Q-瓊脂糖凝膠HP
- 產品/服務：QN4080 Q-瓊脂糖凝膠HP
- 型 號：QN4080
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1070
產品簡介
Q-瓊脂糖凝膠HP由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多Q-瓊脂糖凝膠HP等分離試劑類產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括Q-瓊脂糖凝膠HP在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：Q-瓊脂糖凝膠HP
英文名稱：Q-Sepharose HP
產品貨號：QN4080
產品規格：100ml
Q-瓊脂糖凝膠HP是將季銨基團鍵合在瓊脂糖微球上形成的一種強陰離子交換介質。具有高分辨率，高載量，回收率高和再生能力強等特點。化學穩定性好，可用氫氧化鈉在位清洗。基質的親水特性保證在洗脫過程中減少細胞衍生雜質的非特異性吸附。可用于蛋白質、核酸及多肽的離子交換制備。
基質：6%交聯瓊脂糖凝膠
配基：季銨
交換基團：-N+(CH3)3
離子容量：0.14～0.20mmol Cl-/mL
顆粒大小：34μm
蛋白載量：10mg lgG，24mg HAS/mL
工作pH：1～14(短時間，在位清洗)；2～12(長時間)
化學穩定性：在以下溶液中穩定1mol/L NaOH；8mol/L尿素；6mol/L鹽酸胍；30%異丙醇；70%乙醇；30%SDS，30%乙腈
儲存條件：4～28℃
使用方法：
1．裝柱
① 將所有的試劑和填料達到室溫，配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
② 根據柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠:緩沖液=3:1比例）配成勻漿。
③ 將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。
④ 用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，連結好柱子頂端柱頭。
⑤ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩定。用2～3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2．平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如：Tris、PBS等。
3．上樣
① 樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心、過濾后上柱；
② 一般情況是讓目標產品結合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質，再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
③ 介質對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質、流動相的離子強度和pH值。鹽濃度越小，介質對組分吸附越牢。
4．洗脫
Q瓊脂糖凝膠介質可用增大鹽濃度或減小pH值進行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
5．再生
一般用高鹽濃度的緩沖液（含1～2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體積，接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白質或脂類物質在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 對于以離子鍵結合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
② 對沉淀蛋白、以疏水作用結合的蛋白或者脂類物質，可用1M NaOH去除。
③ 對強疏水性結合的蛋白、脂類等，可用4～10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產生氣泡。
清洗完畢后，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。
7．去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5～6小時或者用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下步驟去除：
① 2倍柱體積的70%的乙醇；
② 2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5
③ 1倍柱體積4M尿素
④ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8.消毒
用0.5～1.0M NaOH室溫下洗8-10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。
注意事項：
1．密封貯存于4～28℃（保存溶液為20%乙醇），通風、干燥的地方，不能冷凍。用過的柱子貯存于4℃（20%乙醇）。
2．在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。
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儲存條件：室溫干燥保存
名稱：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.
貨號：QN4065
規格：10ml
谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.用于分離純化谷胱甘肽S-轉移酶（GST）標簽蛋白、其它來源的谷胱甘肽S-轉移酶以及和谷胱甘肽具有親和作用的蛋白的親和層析介質。pGEX載體表達的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞毫摩爾級的，可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結合GST融合蛋白。
產品參數：
基質：6%瓊脂糖凝膠
配基：肝素
顆粒大小：45～165μm
zuì大流速：600cm/h
工作pH：pH3.0～pH12.0
每毫升蛋白結合量：10mg
操作溫度：室溫
保存條件：貯存于4℃～28℃（保存溶液為20%乙醇）
使用方法：
1．谷胱甘肽樹脂的處理：
① 輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
② 取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細菌培養物大約需要2mL勻漿）。
③ 4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
④ 在樹脂中加入10倍柱床體積預冷的PBS，顛倒數次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
⑤ 每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
2．制備細胞抽提物：
① 每100毫升培養物的細胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
② 加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
③ 用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強行注入黏稠的細胞裂解物中，劇烈振動數次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動溫育10分鐘，4℃ 3000 g離心30分鐘，去除不溶性細胞碎片，上清轉移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
3．純化融合蛋白：
① 細胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每100毫升細菌培養物加2mL樹脂，于室溫輕搖30min。
② 混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
③ 沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數次混勻，洗去未與樹脂結合的蛋白。
④ 4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
⑤ 結合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
4．用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
① 沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動10min，洗脫樹脂上結合的蛋白。
② 4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
③ 重復步驟5和6兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
④ 在結合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據融合蛋白中的位點選擇），每mL樹脂加入50單位溶于1mLPBS的蛋白酶。顛倒離心管數次混勻，室溫下振蕩2-16小時。
⑤ 4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
⑥ 10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質組成。
試劑配制：谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
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