二胺氧化酶是高品質(zhì)的生化檢測試劑盒產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多二胺氧化酶等生化檢測試劑盒產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括二胺氧化酶(DAO)測試盒(微量法)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：二胺氧化酶(DAO)測試盒(微量法)
產(chǎn)品貨號：SK044-1
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣

測定意義:
DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物(腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等)、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。

測定原理：
DAO催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成有色物質(zhì)，在460nm處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算DAO活性。

自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、蒸餾水。

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名稱：過氧化氫(H2O2)測試盒
貨號：KFS349
規(guī)格：50T
過氧化氫H2O2 可以與鉬酸作用生成一種絡(luò)合物在405 nm 處測定其生成量可計算出H2O2 的量。

名稱：葡萄糖檢測試劑盒(比色法)
貨號：HR8691
規(guī)格：100T

名稱：膽固醇檢測試劑盒(比色法)
貨號：HR8699
規(guī)格：100T

名稱：脫氧核糖核酸(DNA)檢測試劑盒
貨號：HR8763
規(guī)格：100T

名稱：ROS活性氧檢測試劑盒(cellRox Green)
貨號：HR8786
規(guī)格：200T
活性氧(Reactive oxygen species,ROS)包括過氧化氫(H2O2，Hydrogen peroxide)、羥基自由基(?OH，Hydroxyl radical)、單線態(tài)氧(1O2，Singlet oxygen)、一氧化氮(NO，Nitric oxide)、超氧陰離子(?O2-，Superoxide anion)、過氧化自由基(ROO?，Peroxyl radical)、過氧羥自由基(HOO?，hydroperoxyl)及其下游產(chǎn)物過氧化物過氧亞硝基陰離子(ONOO-，Peroxynitrite anion)、ClO-和羥化物等，參與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程。
活性氧(reactive oxygen species,ROS)的產(chǎn)生主要是氧化磷酸化的結(jié)果，在呼吸鏈中，在某些位點會有“泄露”的電子直接和氧氣或和其他電子受體反應(yīng)，在酶或非酶作用下引發(fā)一系列反應(yīng)生成不同種類的活性氧：“泄露”的電子zuì初和氧氣反應(yīng)生成超氧陰離子自由基(O2·-)。超氧陰離子遇水生成H2O2，同時過氧化氫也可由氧氣在單胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成，生成的過氧化氫在髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的催化下與Cl-反應(yīng)可生成ClO-，在鐵或銅離子的催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)生成OH·，超氧陰離子遇氮氧化物反應(yīng)生成ONOO-。這些生成的高氧化活性的物質(zhì)統(tǒng)稱為活性氧。
CellROX Green活性氧(ROS)檢測試劑盒是一種利用熒光探針CellROX Green進行活性氧檢測的試劑盒。CellROX Green本身熒光較弱，可自由透過活細(xì)胞膜進入細(xì)胞內(nèi)，并被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化，氧化產(chǎn)物可摻入染色體DNA中，熒光強度增大，產(chǎn)生明亮的綠色熒光。根據(jù)活細(xì)胞中綠色熒光的產(chǎn)生，可以判斷細(xì)胞ROS含量的多少和變化。用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可直接觀察，是一種快速簡便的組織或培養(yǎng)活細(xì)胞中ROS經(jīng)典檢測方法。在激發(fā)波長488nm，發(fā)射波長520 nm附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀、流式細(xì)胞儀等檢測熒光，從而測定細(xì)胞內(nèi)活性氧水平?？梢蕴峁┘?xì)胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、細(xì)胞代謝、氧化應(yīng)激、細(xì)胞膜流動性、膜通透性轉(zhuǎn)換孔、細(xì)胞耗氧率、細(xì)胞內(nèi)pH、細(xì)胞粘附、細(xì)胞自噬等數(shù)百種檢測試劑盒產(chǎn)品。

儲存條件：-20℃避光保存。
有效期：六個月。

※ ※ ※ 使用前請仔細(xì)閱讀產(chǎn)品說明書 ※ ※ ※
使用限制：本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。
產(chǎn)品更新：我公司會更新或升級產(chǎn)品，以優(yōu)化和增強其使用性能，產(chǎn)品說明書會進行相應(yīng)的版本更新。使用產(chǎn)品時，請參照隨產(chǎn)品附帶的說明書，不要參照網(wǎng)上下載的說明書，可能是不同的版本。需要zuì新電子版說明書時可以在收到產(chǎn)品后發(fā)郵件索取。
使用安全：使用時需要合適的實驗室外套，一次性手套。避免皮膚或粘膜與試劑接觸。如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

注意事項：
1．正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗，以優(yōu)化實驗條件，取得zuì佳實驗效果。
2．螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
3．禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
4．樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5．zuì好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底清除殘留清潔劑。
6．實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

產(chǎn)品特點：
● 使用方便：可用激光共聚焦顯微鏡直接觀察、熒光分光光度計、熒光酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀檢測；
● 背景低，靈敏度高；
●線性范圍寬，使用方便。
檢測方法：
流式細(xì)胞儀
熒光顯微鏡
激光共聚焦
樣本類型：
● 懸浮細(xì)胞
● 貼壁細(xì)胞
試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：
儀器：
● 激光共聚焦顯微鏡或熒光分光光度計或酶標(biāo)儀或流式細(xì)胞儀，激發(fā)波長488 nm，發(fā)射波長520 nm。
●離心機● 移液器●冰箱●冰盒
試劑：
● PBS緩沖液(pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
●或者HBSS(Hank"s Balanced Salt Solution；With：Calcium Magnesium Glucose；Without：Phenol Red。Components：CaCl2(anhydrous)140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCl 400mg/L (5.333mM)、KH2PO4 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3 350mg/L(4.167mM)、NaCl 8000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM))
耗材：
●離心管● 吸頭

使用方法：
使用注意事項：
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。
●熒光探針標(biāo)記后，一定要洗凈殘余的未進入細(xì)胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。
●探針標(biāo)記完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認(rèn)探針的標(biāo)記情況是否正常。
● 盡量縮短探針標(biāo)記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。
●對于藥物作用時間較短(2小時以內(nèi))的細(xì)胞，先標(biāo)記探針，后用藥物刺激細(xì)胞。對于藥物作用時間較長(6小時以上)的細(xì)胞，先用活性氧陽性對照誘導(dǎo)劑或相應(yīng)的藥物刺激細(xì)胞，后標(biāo)記探針。
●陽性對照誘導(dǎo)劑可以按照1:1000的比例使用。例如標(biāo)記好探針的細(xì)胞共1毫升，可以加入1微升的陽性對照誘導(dǎo)劑刺激。通常刺激后20-30分鐘內(nèi)可以觀察到非常顯著的活性氧水平升高。對于不同的細(xì)胞，活性氧陽性對照的效果可能有較大的差別。如果在刺激后30分鐘內(nèi)觀察不到活性氧的升高，可以適當(dāng)提高活性氧陽性對照誘導(dǎo)劑的濃度。如果活性氧升高得過快，可以適當(dāng)降低活性氧陽性對照誘導(dǎo)劑的濃度?！?CellROX Green在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。
●對不同的細(xì)胞和組織，應(yīng)選擇合適的孵育時間和濃度，以觀察ROS的變化，很多細(xì)胞內(nèi)的ROS水平較低，需要根據(jù)實際情況適當(dāng)延長孵育時間。
● CellROX Green探針可以根據(jù)需要的用量分裝后凍存，避免反復(fù)凍融。
● CellROX Green不可以一次性全部稀釋后長期保存不用，稀釋后穩(wěn)定性變差，有效期縮短。
●標(biāo)記的條件因細(xì)胞種類而異，根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整，在每次實驗前，請先根據(jù)不同的實驗要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞的膜通透性等進行優(yōu)化，確定zuì佳條件。以下方法僅供參考。
CellROX Green探針配制：
根據(jù)需要的用量，用新鮮無血清培養(yǎng)基或HBSS緩沖液稀釋CellROX Green探針后充分混勻，避光保存?zhèn)溆谩?br /> 探針使用終濃度200-1000倍稀釋。一般預(yù)實驗起始濃度按500倍即可。
CellROX Green探針標(biāo)記：
1．CellROX Green溶液可在新鮮無血清培養(yǎng)基、HBSS緩沖鹽溶液或組織灌流液中稀釋到所需濃度，終濃度200-1000倍稀釋，以此染色液更換細(xì)胞培養(yǎng)基或灌流液；也可直接向無血清細(xì)胞孵育液體或灌流液中加入CellROX Green探針溶液至所需濃度。
【注】
●檢測貼壁細(xì)胞時，熒光顯微鏡檢測可以原位染色也可以消化下來后染色，流式檢測消化下來后染色。
2．依據(jù)細(xì)胞ROS含量的不同，CellROX Green終濃度可選擇在200-1000倍稀釋的范圍，孵育時間可選擇30分鐘-4小時，在37℃或室溫進行避光孵育。
3．孵育結(jié)束后，用PBS等新鮮緩沖液清洗細(xì)胞或組織。漂洗時間要短。
熒光顯微鏡觀察：
1．對貼壁生長細(xì)胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細(xì)胞，取25-50μl細(xì)胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。
2．熒光顯微鏡下觀察。
流式細(xì)胞儀分析：
1．染色并洗滌細(xì)胞后用0.5～1 ml冷PBS重懸細(xì)胞(5～10萬)。
2．采用488nm波長激發(fā)，發(fā)射波長520 nm，測定待測細(xì)胞平均熒光強度。

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