BTN91202 雙酶一管式RT-PCR試劑盒
- 產品/服務：BTN91202 雙酶一管式RT-PCR試劑盒
- 型 號：BTN91202
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-08-09
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：931
產品簡介
北京百奧萊博供應的雙酶一管式RT-PCR試劑盒用于科學研究，我公司的雙酶一管式RT-PCR試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq)
英文名稱：Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit
產品貨號：BTN91202
產品規格：50次
本產品是經過精心優化的、基于MMLV 逆轉錄酶和Taq DNA聚合酶的雙酶一管式RT-PCR試劑盒，它含有除模版RNA和其專一性引物以外的所有RT-PCR試劑，包括MMLV 逆轉錄酶、Taq DNA聚合酶、RT-PCR緩沖液等，可以在同一反應管內完成RNA→cDNA→PCR反應(RT-PCR反應)。
產品特點：
1.一管式完成RT-PCR反應，避免樣品交叉污染。
2. 即開即用，用戶不需要單獨準備RT-PCR所需的各種試劑。
3. 主要成分只有兩個RT-PCR buffer和MMLV-Taq Mix，將加樣步驟減少到zuì低，大降低了加樣誤差，增加了可重復性。
4. 使用范圍廣，適用于從病毒RNA 到人RNA的各種RNA 模板。
5.高靈敏度，每個RT-PCR 體系zuì低可以檢測200拷貝的RNA分子，可擴增的模版RNA的zuì長達2000nt。
6. 所得RT-PCR產物可以直接用于AT克隆。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 750μl |
| MMLV-Taq Mix | 100μl |
| RNase-free水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
注意：所有離心管用前zuì好全部短暫離心幾秒使管壁上溶液沉淀到管底。下面以一個30μL 體系的RT-PCR 為例，如果體積不同，各成分用量需要適當調節。
1.在一干凈的無RNase的PCR管中，先加入下列成分：
| 成分 | 陰性對照 | 樣品 |
| RNA模板(自備，分下面三種情況) | 無 | 見下 |
| 總RNA | 無 | 100-500ng |
| 或poly(A)mRNA | 無 | 10-500ng |
| 或體外轉錄得到的專一RNA | 無 | 0.01 pg-500ng |
| RNA特異性引物一(自備) | 終濃度300nM | 終濃度300nM |
| RNA特異性引物二(自備) | 終濃度300nM | 終濃度300nM |
| 探針(僅對Realtime RT-PCR) | 終濃度200nM | 終濃度200nM |
| RNase-free水 | 補到13μL | 補到13μL |
| 雙酶一管式RT-PCR Buffer(2×) | 15μl | 15μl |
| MMLV-Taq Mix | 2μl | 2μl |
注：通常初次使用本試劑時，可用引物濃度300nM，探針濃度200nM進行實驗，根據實驗結果具體情況，在200～800nM 范圍內調整引物濃度，在50～400nM 范圍內調整探針濃度以達到zuì佳檢測效果。引物、探針、待檢樣品的具體加量用戶可以根據實際情況調整，同時增減DEPC 水用量，保證總反應體積不變即可。
2. 輕柔混合均勻后放入PCR 儀中進行RT-PCR。
3. 設定RT-PCR反應條件時，一般將RT的條件設定成42℃，30 鐘，后接94℃變性5分鐘，然后進入PCR循環(PCR參數將根據自備引物的Tm 值由用戶自行決定注)、zuì后72℃，5分鐘。對Realtime PCR，在復性步驟設置熒光檢測，檢測通道：FAM/HEX/VIC/ROX/CY5
4. RT-PCR結束后取5-10μL電泳檢查。
注意事項：
1. 使用已校準的移液器，選用一次性PCR反應管、離心管、tip 頭等進行樣本處理及配液等操作，所有用具應不含DNA酶和RNA酶。
2.引物、探針設計過程中應盡可能避免發夾結構、二聚體等現象的發生，探針的位置盡可能靠近上游引物，PCR 目標片段zuì好小于200bp，盡可能在150bp以內。
3. 實驗樣品盡可能新鮮，提取過程應嚴防RNA酶污染及操作不當導致的RNA 降解。
4. 使用本產品時建議對RT-PCR擴增條件、引物濃度和樣品用量進行調整，選擇zuì適當的引物濃度、樣品濃度和PCR擴增條件。
5. 本產品使用前應在室溫充分融解，并用漩渦震蕩器充分混勻。
6. 統一配液后分裝以減少加樣誤差，每次實驗應設置陰性對照。
7. 禁止標記PCR反應管，避免外源性熒光信號干擾。
8. PCR反應管中不能有氣泡，否則會產生非特異的熒光信號。若有氣泡，可先用手指將氣泡彈破，然后再低速離心消除。
9. 實時熒光PCR 儀器連續進行實驗時，zuì好間隔一小時以上再使用。
10. 實時熒光PCR 儀需經常校正和清潔載樣板板孔。
11. 若使用Roch LightCyclerTM熒光PCR 儀，應將毛細管放在專門套管中，以便分裝反應體系和加入待檢樣品。前述操作完畢應低速離心數秒再將毛細管垂直緩慢放入樣品架，以免折斷；若發生折斷，應小心取出，用專用小毛刷擦拭干凈后方可進行擴增。
12. 實驗室應嚴格分區，避免PCR產物污染。
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| 貨號 | 名稱 | 規格 |
| BTN91202 | 雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq) | 50次 |
| BTN100203 | 通用型LAMP試劑盒 | 50次 |
| WE0106 | 2×BAmp MasterMix(含染料) | 5ml |
| WE0108 | 2×Pfu MasterMix(含染料) | 5ml |
| WE0129 | 一步法RT-PCR試劑盒 | 100次 |
| WE0145 | 實時熒光定量PCR的預混體系(探針法)(低含量ROX校正染料) | 5ml |
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氯化錳分子量為125.8，CAS號為7773-01-5，水合氯化錳外觀為玫瑰色單斜晶體；無水氯化錳外觀為桃紅色結晶。密度為2.977g/cm3。熔點是650℃。在高于熔點溫度下升華。沸點1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。
儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。
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貨號：BTN90708
規格：1.5mL
本產品是即用型的2×高保真PCR預配反應液，含有除引物、模板以外的所有PCR試劑，包括Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等，特別適合于高保真PCR反應。
產品特點：
1. Pfu DNA聚合酶是使用zuì廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。
2. 使用時只需在加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應，非常方便，簡化了PCR的準備工作。
3. PCR反應所必需試劑全集于一管之中，數分鐘即可完成反應體系配置。由于加樣過程少，有利于減少污染，降低實驗誤差。
4. 本產品A型含電泳染料，PCR反應液可直接上樣電泳，進一步簡化了操作。
5. 由于各成分的濃度和比例都經過精心優化，反應的靈敏度高，特異性強。
6.適用于基因的高保真擴增和基因定點突變等實驗，得到的PCR產物可用于平末端克隆。
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為12個月。
使用方法：
將本產品與用戶自備的模板，引物混合液按下列推薦使用量(30μL反應體系)加入PCR 管中即可進行PCR，反應結束后直接取5-15μL電泳檢查擴增結果。如果反應體系不是30μL，各成分需要按比例增加或減少。
| 試劑 | 加入量 | |
| 2×高保真PCR MagicMix | 25μL | |
| DNA模板(自備) | 哺乳動物基因組DNA | 0.5-1μg |
| 酵母基因組DNA | 5-500ng | |
| 細菌基因組DNA | 0.5-50ng | |
| 質粒DNA | 5-500ng | |
| PCR回收片段 | 1-100pg | |
| PCR引物(自備) | 10-20pmol each | |
| 補水到 | 30μL | |
參考擴增條件：
| 預變性 | 94℃ | 4min |
| PCR(30個循環) | 94℃ | 30s |
| 50℃ | 30s | |
| 68℃ | 0.5kb/min | |
| 延伸 | 68℃ | 10min |
注意事項：
1. 本產品的Pfu DNA聚合酶比Taq DNA聚合酶的延伸反應速率低，因此我們推薦的擴增延伸反應時間為每kb 需2 分種。
2. Pfu酶3′-5′外切酶活性可降解引物，所以強烈建議在冰上配置完成PCR反應液后，立即放入PCR 儀中進行擴增，擴增完畢后立即進行電泳檢測。
3. 本產品擴增產物為平末端，不可以直接進行TA 克隆，可以使用ClionB載體(BTN51104)進行克隆。如需要進行TA克隆，建議對PCR產物純化后，用加A 試劑盒(BTN60105)加A后再進行TA克隆。
4. 由于Pfu 無 5′到 3′外切酶的活性，所以本試劑盒不能用于實時熒光PCR。
疑難解答：
Q：為何Pfu DNA Polymerase擴增效率不如Taq DNA Polymerase？
A：一是由于Pfu DNA Polymerase 具有3′-5′的外切活性，所以在合成過程中，該酶會隨時校對新添加的核苷酸是否配對，影響了合成效率；二是它能通過3′-5′的外切活性使引物部分降解，降低引物結合模板的能力，進而影響擴增效率。三是上面提到的尿嘧叮抑制作用。
Q：使用本產品時還有哪些注意事項？
A：1.引物長度和濃度一般應比常規的PCR 長和高(考慮到被Pfu DNA Polymerase的3′-5′的外切活性降解的因素)；
2.zuì好在反應前加Pfu DNA Polymerase。
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