YT413 溶菌酶(>20KU/mg)

產品簡介
溶菌酶(>20KU/mg)是高品質的克隆與表達產品,由北京百奧萊博供應,本產品用于科研試驗,我公司專注于克隆與表達產品的研發、生產和供應,為您提供的溶菌酶(>20KU/mg)質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示:包括溶菌酶(>20KU/mg)在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:溶菌酶(>20KU/mg)
英文名稱:Lysozyme
產品貨號:YT413
產品規格:0.5g
本品純化自蛋清,不含DNase、RNase和Protease,可以用于以質粒抽提、蛋白純化等為目的的細菌裂解。
儲存條件:-20℃。
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名稱:B載體
貨號:BTN51104
規格:2μg
本產品是專門用于快速克隆平末端DNA片段的專用載體,它是由Sma I酶切ClionG載體后經過純化得到的即用型線性載體。跟ClionG載體一樣,本產品帶有自殺基因,Sma I位點位于該基因之中,只有當外源平末端DNA 插入片段插入Sma I位點,連接后的DNA轉化的細胞才能生長,所以zuì后得到的轉化子幾乎都是含有平末端DNA 插入片段的重組子。
產品特點:
1. 即用性,可以直接用于連接反應,免去繁瑣的酶切,電泳檢測,純化,去磷酸化,再純化等步驟。
2. 具有Clion-G載體的所有優點,包括零背景,適用于所有E.Coli菌株,多拷貝的colEI型復制起始位點。
3.率,由于自殺基因的使用有效地減除了載體自身環化對平末端DNA 克隆的影響,自身環化得到的轉化子在有選擇液存在時只占總轉化子的1%-5%。
4. 應用廣泛,可用于克隆酶切產生的平末端DNA,Pfu酶擴增的PCR片段,cDNA片段,3′和5′RACE片段,Taq酶擴增的PCR片段(部分為平末端)。
儲存條件:低溫運輸,-20℃保存,有效期兩年。
自備試劑:
1.外源DNA片段。如果含又DNA片段的反應液中不含其他載體DNA(如酶切反應液,PCR反應液),可以不需要凝膠回收,滅活酶后即可直接將反應液用于連接反應。PCR引物5′端一般為OH基團,zuì好在PCR后用T4 激酶磷酸化,否則連接效率低。
2.感受態宿主菌。DH5α,DH10B或HB101等常用E.coli菌株。
3.連接反應試劑。請購買現成試劑盒。
4. 選擇培養基。在倒LB 平板之前隨產品贈送的選擇液和Amp(如果附贈的選擇液含Amp,則不必須額外加Amp)按比例加入到LB 之中,使選擇液終濃度為1×,Amp 終濃度為50μg/mL(如果附贈的選擇液含Amp,稀釋到1X后Amp的終濃度即為50μg/mL),混勻后倒盤。
使用方法:
1.連接反應
a. 取新的經過滅菌處理的0.5mL Eppendorf 管,編號。
b. 將100 ng載體DNA轉移到無菌離心管中,加兩倍摩爾量的外源DNA片段,折合成重量(ng)=(外源DNA片段bp 數X 100 ng×2)/5330bp(載體DNA 長度)
c. 加蒸餾水至體積為8μl,于45℃保溫5分鐘,使重新退火的粘端解鏈。將混和物冷卻至0℃。平末端DNA片段的克隆可以省去45℃保溫5分鐘這一步。
d. 加入10×T4 DNA ligase buffer 1μl,T4 DNA ligase 0.5μl,混勻后用微量離心機將液體全部甩到管底,于16℃保溫1-24小時。
e. 同時做只有外源DNA片段沒有質粒載體的組對照反應。沒有必要做只有質粒載體而無外源DNA的對照組,因為自身環化的載體不能生長,能夠生長的轉化子基本上是兩個載體分子相互連接形成的新載體。但在有兩倍于外源DNA片段存在的情況下,兩個載體分子連接的機率很小。
2. E.coli感受態細胞的轉化
a. 各取每組連接反應液2μl按標準方法轉化E. coli感受態細胞。
b. 每組連接反應轉化原液取100μl用無菌玻棒均勻涂布于篩選培養基上,37℃下培養半小時以上,直至液體被完全吸收。
MCS位點:

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