BTN81024 大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
- 產(chǎn)品/服務(wù)：BTN81024 大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
- 型 號(hào)：BTN81024
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-06
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：1104
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶(hù)稱(chēng)道，了解更多大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞等克隆與表達(dá)產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢(xún)訂購(gòu)。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱(chēng)：大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
英文名稱(chēng)：E.coli DH5α Chemical Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)：BTN81024
產(chǎn)品規(guī)格：0.1mL*10
本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ)，可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率不低于107，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。
本菌種來(lái)源于Hoffman-Berling 1100菌種。
| 基因型 | 表現(xiàn)型 |
| deo R | 組成型合成脫氧核糖 |
| end A1 | 核酸內(nèi)切酶I缺失 |
| gyr A96 | 具有萘啶酮酸抗性 |
| hsd R17 | 限制性酶EcoK缺失 |
| △(lac)U169 | lac基因缺失 |
| rec A1 | DNA重組活性降低 |
| Rel A1 | 允許在無(wú)蛋白質(zhì)合成時(shí)有RNA合成 |
| sup E44 | 抑制琥珀突變突變，為某些噬菌體必需 |
| thi-1 | 不能自身合成硫氨 |
| φ80(lac ZΔM15) | 提供α-互補(bǔ)所需的ω片斷 |
儲(chǔ)存條件：干冰運(yùn)輸、-80℃保存，有效期半年。
使用方法：
1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。
以下實(shí)驗(yàn)以50μL感受態(tài)細(xì)胞為例。
2. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個(gè)離心管中加入800μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，200rpm(小于225rpm)振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
注意事項(xiàng)：
1、涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少，可通過(guò)離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
根據(jù)您的關(guān)注的大腸桿菌DH5α化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：
| 貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
| BTN130803 | pression/BTN130803.html" target="_blank">單細(xì)胞裂解液(DNA提取) | 1mL |
| BTN130805 | pression/BTN130805.html" target="_blank">單細(xì)胞懸浮液 | 1mL |
| BTN140218 | pression/BTN140218.html" target="_blank">大腸桿菌DB3.1化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10*100μl |
| BTN90504 | pression/BTN90504.html" target="_blank">大腸桿菌XL1-Blue化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 0.1mL*10 |
| BTN120692 | pression/BTN120692.html" target="_blank">硫酸慶大霉素 | 2mL |
| YT475 | pression/YT475.html" target="_blank">N端DsRed標(biāo)簽融合蛋白質(zhì)粒(紅色熒光蛋白) | 1μg |
| YT476 | pression/YT476.html" target="_blank">N端EGFP標(biāo)簽融合蛋白質(zhì)粒(綠色熒光蛋白) | 1μg |
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名稱(chēng)：DNA磷酸化試劑盒
貨號(hào)：BTN130813
規(guī)格：20次
人工合成的PCR引物、l
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.可以快速把DNA的5′端的-OH基團(tuán)變成-PO4基團(tuán)，使人工合成的DNA(包括PCR產(chǎn)物)跟天然DNA一樣有高的連接效率。
2. 既可以對(duì)單鏈DNA進(jìn)行磷酸化處理，也可以對(duì)雙鏈DNA片段同時(shí)磷酸化處理。
3.處理后的DNA可以直接用于連接反應(yīng)、克隆等，不需要純化。
4. 本產(chǎn)品足夠20次DNA的磷酸化實(shí)驗(yàn)。
| 成分 | 規(guī)格 |
| 10×TPK緩沖液 | 50μl |
| ATP溶液(10mM) | 100μl |
| T4 多核苷酸激酶(10U/μL) | 20μl |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期為6個(gè)月。
使用方法：
一：雙鏈DNA片段(5′端為-OH基團(tuán)的)的磷酸化
注意：如果是PCR產(chǎn)物，一定要先膠回收，不能使用沒(méi)經(jīng)過(guò)純化的PCR反應(yīng)液，因?yàn)槠渲械臍埩鬚CR引物會(huì)耗掉大量的激酶，降低PCR產(chǎn)物的磷酸化效率。
1、在微量離心管中配制下列反應(yīng)液(20μL)：
| 成分 | 用量 |
| PCR膠回收片段 | 2μL(不超過(guò)10pmol) |
| 10×TPK緩沖液 | 2μl |
| ATP溶液(10mM) | 5μl |
| T4 多核苷酸激酶(10U/μL) | 1μl |
| 超純水到 | 20μl |
2、37℃反應(yīng)30分鐘。
3、70℃熱處理5分鐘，滅活酶。
4、可直接用于后續(xù)克隆(加入量不要超過(guò)總體積的1/5)。
二：單鏈DNA片段的磷酸化
注：?jiǎn)捂淒NA 包括局部雙鏈的DNA。引物，l
5、在微量離心管中配制下列反應(yīng)液(20μL)：
| 成分 | 用量 |
| 單鏈DNA片段 | 5-10 pmol |
| 10×TPK緩沖液 | 2μl |
| ATP溶液(10mM) | 1μl |
| T4 多核苷酸激酶(10U/μL) | 1μl |
| 超純水到 | 20μl |
6、37℃反應(yīng)30分鐘。
7、70℃熱處理5分鐘，滅活激酶。
8、可直接用于后續(xù)克隆(加入量不要超過(guò)總體積的1/5)。如果使用濃度高，則可能需要乙醇沉淀法濃縮DNA。如果單鏈DNA的濃度低于5pmol，還需要在乙醇沉淀時(shí)加入核酸助沉劑。沉淀得到的DNA可溶解在適量的水中。
附：乙醇沉淀濃度DNA(本試劑盒不提供相關(guān)試劑，下列操作僅供參考：
1、在DNA溶液中加入0.1倍體積的3 M 乙酸鈉溶液(pH5.2)。
2、再加入2.5倍體積的無(wú)水乙醇和4uL 核酸助沉劑。
3、混勻后12000g 4℃離心10分鐘，小心棄上清。
4、加入1mL 70%乙醇，短暫離心3分鐘后小心棄上清。
5、短暫離心5秒，吸棄殘留液體(約30-50μL)。
6、室溫放置2分鐘干燥后加入適量的超純水溶解DNA，立即使用或放-20℃長(zhǎng)期保存。
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