SV0581 PaeR7I限制性內(nèi)切酶
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SV0581 PaeR7I限制性內(nèi)切酶
- 型 號：SV0581
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-06
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1033
產(chǎn)品簡介
PaeR7I限制性內(nèi)切酶是高品質(zhì)的工具酶產(chǎn)品，由北京百奧萊博供應(yīng)，本產(chǎn)品用于科學(xué)研究，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多PaeR7I限制性內(nèi)切酶等工具酶產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括PaeR7I限制性內(nèi)切酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：PaeR7I限制性內(nèi)切酶
英文名稱：PaeR7I Restriction Endonuclease
產(chǎn)品貨號：SV0581
產(chǎn)品規(guī)格：10KU|2KU|1KU
在不同反應(yīng)緩沖液的活性:
BalbBuffer 1.1: 25%
BalbBuffer 2.1:
BalbBuffer 3.1: 10%
CutSmart Buffer:
特性:
CutSmart、重組酶、省時酶。
反應(yīng)條件:
CutSmart 緩沖液，37℃。
濃度:
20,000units/ml。
甲基化敏感性:
對哺乳動物基因組DNA CpG甲基化敏感。
注意事項:
PaeR7l 與 Xhol的識別序列一致。但實驗證明，CTCTCGAG 序列不能被 PaeR7l 切割。
根據(jù)您的關(guān)注的PaeR7I限制性內(nèi)切酶，您可能還對以下產(chǎn)品有需求：
名稱：RNase A溶液(2mg/mL)
貨號：BTN60309
規(guī)格：1.5mL
本產(chǎn)品是濃度為2mg/mL的RNase A溶液，不含DNase和蛋白酶活性，可以用于DNA提取(包括質(zhì)粒DNA提取)時和蛋白質(zhì)純化時去除RNA污染。
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
名稱：RNase H
貨號：YT511
規(guī)格：100U
本酶是一種核糖核酸內(nèi)切酶，可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA。RNase H不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵，即不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。
特點：特異性消化DNA-RNA雜合鏈中的RNA，常用于cDNA第二鏈的合成。
用途：DNA-RNA雜合鏈中去除RNA，例如cDNA第二條鏈合成前去除mRNA；通過互補的DNA序列實現(xiàn)對RNA的定點剪切；除去雜交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；體外多腺苷酸化反應(yīng)(polyadenylation reaction)產(chǎn)物研究。
來源：E.coli MRE-600細(xì)胞。
分子量：約18.4kDa(單體)。
活性定義：37℃20分鐘內(nèi)，能夠催化1nmol雜合雙鏈中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定義為1個活性單位。
活性檢測條件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl2，1mM DTT，24μM[3H]-poly(A).poly(dT)，0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
酶儲存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl2，10mM DTT。
失活或抑制：65℃加熱10分鐘可使RNase H失活。金屬離子螯合劑和巰基封閉劑均能抑制RNase H活性。
儲存條件：-20℃。
使用說明：
1. DNA-RNA雜合鏈中去除RNA：
a. 用反轉(zhuǎn)錄酶，例如RT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶或RT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
b. 在冰浴上向已經(jīng)合成條鏈的20μl反應(yīng)體系中依次加入如下試劑：
Reaction Buffer (10X)————2μl
無核酸酶去離子水——————217.8μl
RNase H (5U/μl)——————20.2μl
c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在zuì低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 37℃孵育1小時。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混勻，以終止反應(yīng)。
f. 后續(xù)可以使用酚氯fǎng抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當(dāng)?shù)腄NA純化試劑盒進行純化。DNA純化試劑盒(YT009)可以向百奧萊博訂購。
說明：其他情況DNA-RNA雜合鏈中去除RNA的條件可以參考上述條件進行。RNase H反應(yīng)的pH范圍約在7.5-8.3均可。
2. 雜合鏈中RNA的去除和cDNA第二鏈的合成：
a. 用反轉(zhuǎn)錄酶，例如RT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶(YT392)、RT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)(YT393)或cDNA 鏈合成試劑盒(RNase H-)(YT395)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
b. 在冰浴上向已經(jīng)合成條鏈的20μl反應(yīng)體系中依次加入如下試劑：
Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I————8μl
無核酸酶去離子水—————————————————68.8μl
RNase H (5U/μl)—————————————————0.2μl
DNA Polymerase I, E.coli—————————————3μl (30U)
c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用 Vortex在zuì低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 15℃孵育2小時。(注意：反應(yīng)溫度不能超過15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混勻，以終止反應(yīng)。
f. 后續(xù)可以使用酚氯fǎng抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當(dāng)?shù)腄NA純化試劑盒進行純化。DNA純化試劑盒(YT009)可以向百奧萊博訂購。
注：Reaction Buffer (10X) for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl2，10mM DTT。
3. 其他用途請參考上述用途或相關(guān)文獻資料進行。
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