QN4046 葡聚糖凝膠G-10
- 產(chǎn)品/服務(wù)：QN4046 葡聚糖凝膠G-10
- 型 號(hào)：QN4046
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-05
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：990
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
葡聚糖凝膠G-10的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的分離試劑類產(chǎn)品，本制品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多葡聚糖凝膠G-10等分離試劑類產(chǎn)品請(qǐng)聯(lián)系我司咨詢訂購(gòu)。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括葡聚糖凝膠G-10在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：葡聚糖凝膠G-10
英文名稱：Sephadex G-10 medium
產(chǎn)品貨號(hào)：QN4046
產(chǎn)品規(guī)格：25g|100g|500g
葡聚糖凝膠G-10利用分子篩作用，進(jìn)行緩沖液交換、脫鹽，分離小分子，去除小分子。
CAS：9050-68-4
凝膠類型：凝膠過(guò)濾填料，親水型凝膠
結(jié)構(gòu)成分：交聯(lián)葡聚糖
粒 徑：40-120μm
工作PH值：2-13
操作溫度：4-40℃
球蛋白分離范圍：≤700
保存條件：4-25℃
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名稱：XAD7HP吸附樹脂
貨號(hào)：QN4043
規(guī)格：100g
XAD7HP吸附樹脂屬弱性吸附樹脂，可用于分離多肽等物質(zhì)。可用于分子量高達(dá)60,000的化合物的弱性吸附劑樹脂，具體用途包括胰島素、黃腐酸和腐殖化合物的吸附，干燥廢棄物、有機(jī)物的去除和回收，以及抗生素的回收。
名稱：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠4FF
貨號(hào)：QN4066
規(guī)格：10ml
pGEX載體表達(dá)的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合，因此可以通過(guò)谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進(jìn)行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過(guò)形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對(duì)底物的親和力是亞毫摩爾級(jí)的，因此谷胱甘肽固化于瓊脂糖形成的親和層析樹脂對(duì)GST及其融合蛋白的純化效率很高。可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結(jié)合GST融合蛋白。樹脂用3mol/L NaCl的緩沖液再生。谷胱甘肽瓊脂糖對(duì)GST融合蛋白的結(jié)合能力很強(qiáng)（每毫升柱床體積的樹脂能結(jié)合8毫克融合蛋白）。
技術(shù)參數(shù)：
粒度：45～165μm
流速：75cm/h
工作PH：pH4.0～10.0
耐壓：0.3Mpa
載量：＞10mg谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶
使用說(shuō)明：
一、谷胱甘肽樹脂的處理：
1．輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
2．取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細(xì)菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿）。
3．4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
4．在樹脂中加入10倍柱床體積預(yù)冷的PBS，顛倒數(shù)次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
5．每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數(shù)次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
二、制備細(xì)胞抽提物：
6．每100毫升培養(yǎng)物的細(xì)胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
7．加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
8．用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強(qiáng)行注入黏稠的細(xì)胞裂解物中，劇烈振動(dòng)數(shù)次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動(dòng)溫育10分鐘，4℃ 3000g離心30分鐘，去除不溶性細(xì)胞碎片，上清轉(zhuǎn)移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
三、純化融合蛋白：
9．細(xì)胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每100毫升細(xì)菌培養(yǎng)物加2mL樹脂，于室溫輕搖30min。
10．混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
11．沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數(shù)次混勻，洗去未與樹脂結(jié)合的蛋白。
12．4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
13．重復(fù)步驟11和12兩次。
14．結(jié)合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
四、用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動(dòng)10min，洗脫樹脂上結(jié)合的蛋白。
16．4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
17．重復(fù)步驟a和b兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結(jié)合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在結(jié)合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據(jù)融合蛋白中的位點(diǎn)選擇），每mL樹脂加入50單位溶于1mL PBS的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻，室溫下振蕩2～16小時(shí)。用小規(guī)模實(shí)驗(yàn)確定時(shí)間。
19．4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結(jié)合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
20．10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。
試劑配制：
谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)
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