熱啟動高保真Taq DNA聚合酶由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多熱啟動高保真Taq DNA聚合酶等核酸擴增(PCR)產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括熱啟動高保真Taq DNA聚合酶在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：熱啟動高保真Taq DNA聚合酶
英文名稱：Taq Platinum DNA Polymerase
產品貨號：WH0072
產品規格：250U|500U

本制品是經過化學修飾的熱啟動耐熱聚合酶，具有3′-5′外切酶活性和5′-3′外切核酸酶活性。在常溫下Taq Platinum DNA Polymerase的酶活性被封閉，在94℃加熱5-10分鐘才能回復正常活力，從而避免了PCR反應起始循環前低溫條件下由引物非特異性退火或引物二聚體引起的非特異性擴增，大大提高了PCR反應的靈敏度及特異性。同時Taq Platinum DNA Polymerase具有很高的保真度，僅次于Pfu聚合酶，且DNA聚合時的延伸速度比Pfu聚合酶快，擴增效率更高。PCR產物可直接進行T/A載體克隆，如需提高克隆效率，建議先純化，加A后再進行T/A載體克隆。本制品可用于從復雜模板中如基因組等擴增高保真產物，如表達基因的克隆、基因的定點突變和細胞內基因點突變的分析（SNP）等。

產品組成：

組分	WH0072-1	WH0072-2
Taq Platinum DNA Polymerase	250U	500 U
10×Taq Platinum Buffer Ⅰ	1.8ml	1.8ml
10×Taq Platinum Buffer Ⅱ	1.8ml	1.8ml

10×Taq Platinum Buffer：
BufferⅠ：200mM Tris-HCl （pH 8.8);100 mM KCl;100 mM （NH4)2SO4;15 mM MgSO4;其它成分。
BufferⅡ：200mM Tris-HCl （pH 9.0);200mM KCl;60 mM （NH4)2SO4;15 mM MgCl2;其它成分。
注意：請先使用BufferⅠ，當使用BufferⅠ不能擴增時再試用BufferⅡ

儲存條件：-20℃保存

活性定義：
1單位（U）Taq Platinum DNA Polymerase活力定義為在74℃、30min內，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。

質量控制：
SDS-PAGE檢測純度大于99%；經檢測無外源核酸酶活性；PCR方法檢測無宿主殘余DNA；能有效地擴增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無明顯活性改變。

使用舉例：
注意：以下舉例為常規PCR反應系統，僅供參考。實際反應條件因模板、引物等的結構不同而各異，需根據模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長短等具體情況，設定zuì佳反應條件。以人基因組DNA為模板，擴增1 kb的片段
1.反應體系的建立：50μl反應體系如下（可根據比例放大或縮小反應體系)：

組份	體積
Template	<1μg
Primer 1（10μM)	1 μl
Primer 2（10μM)	1 μl
10×Taq Platinum Buffer	5 μl
dNTP Mixture（2.5 mM)	4 μl
Taq Platinum（2.5 U/μl)	0.5-1 μl
ddH2O	補至50μl

2．PCR反應循環的設置：
  
3．結果檢測：反應結束后取5 μl反應產物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。

根據您的關注的熱啟動高保真Taq DNA聚合酶，您可能還對以下產品有需求：



名稱：PCR Mix染料
貨號：BTN131212
規格：10mL
本產品可加入到PCR反應液中，使PCR產物可直接上樣電泳，其分子量相當于50bp大小的DNA片段，不干擾觀察。
注：本產品不是PCR熒光染料，是一類可見光染料(類似電泳用的溴酚藍，二甲苯藍等指示劑)

儲存條件：低溫運輸和-20℃保存、有效期一年。

名稱：5M甜菜堿溶液，PCR級
貨號：BTN70902
規格：1.5mL
本產品為濃度為5M的甜菜堿的水溶液，可以直接加入到PCR反應或測序反應中提高擴增或測序的效率，其詳細的用途包括：
1. 降低富含GC的模板形成二級結構的可能,有助于富含GC的模板的PCR擴增和測序。
2. 降低變性溫度對堿基的依賴性。
3. 提高LA-PCR的擴增效率。
4. 提高Taq DNA聚合酶的穩定性。

儲存條件：低溫運輸，4℃保存，有效期一年。

使用方法：將本產品加入PCR反應體系中，使其終濃度在1.0-1.7M之間即可。其他按常規操作進行即可。


名稱：SP6體外轉錄試劑盒
貨號：BTN91107
規格：50次
本試劑盒是基于SP6 RNA聚合酶的RNA體外轉錄試劑盒，它利用含有SP6啟動子的模版DNA，以NTP為底物，從SP6啟動子下游開始合成與模版DNA中一條鏈互補的RNA，簡單快速獲得大量的RNA分子。

產品特點：
1. 即開即用，用戶只需提供含SP6啟動子的DNA模板即可以進行體外轉錄實驗，不需要單獨準備每一個成份。
2. 單溶液預配液，減少加樣次數，避免了操作誤差，增加了可重復性。
3. 模版DNA可以是線性化的質粒DNA，也可以是PCR擴增產物。
4.可以合成的RNA的zuì佳長度在20nt到2000nt之間。
5.產品配方經過精心優化，每μg DNA模版可以合成2-6μg RNA。
 得到的RNA可以用于RNA 結構研究、核酶生物化學、體外翻譯、RNA-蛋白質相互作用、反義技術、SELEX技術和RNA干擾(RNAi)等實驗。

試劑盒組成：

成分	規格
轉錄預配液(2×)	0.5mL
陽性對照DNA(1.3 kb片段)	20μL(10 ng/μL)
SP6 RNA聚合酶混合液	50μl
RNase-free水	1ml
說明書	1份

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
一、制備DNA模板
PCR片段和質粒DNA都可以用作體外轉錄的模板，但是必須注意以下幾點。一是必須使用線性化的DNA。如果是質粒DNA，則必須先用適當的限制性內切酶切成線狀。二是需要轉錄的DNA序列的上游必須有SP6啟動子。如果模板是PCR產物，則可以在設計引物時將SP6啟動子序列(5′ATT TAG GTG ACA CTA TAG AGN G 3′)加上，轉錄其實是從3端G AGN G中的個G開始。如果是將DNA片段克隆到載體上，則需要選擇有SP6啟動子的載體，并且克隆位點必須位于SP6啟動子下游。三是需要轉錄的DNA序列的下游端zuì好不要是3′突出。如果是3′突出(如選擇了Pst I來線性化質粒)，則zuì好用T4 DNA聚合酶修平。四是必須保證DNA模板中沒有RNase。由于提取質粒DNA的過程中一般要使用大量的RNase A，因此質粒DNA一般都有嚴重的RNase A污染，所以在用作模板前，zuì好采取膠回收得方法回收質粒DNA。并且加入少量總RNA一起保溫，然后電泳檢測RNA是否被降解，以此判斷純化的DNA模板是否有殘留RNase A。
二、體外轉錄反應
1.在一個RNase-free的塑料離心管中，在室溫下(不是在4℃下)按次序加入下列成分：

成分	加入量	備注
DNA模板	xμL	總量在50 ng-1μg(如果模板是PCR片段，建議用50 ng左右；如果模板是質粒DNA，建議用1μg左右；如果用本產品提供的陽性對照，建議用4μL)
SP6轉錄預配液(2×)	10μl	本成分還含其他促進劑，所以是混合物
RNase-free水	補水到20μL

注：此為20μL反應體系的用量，對其他反應體系，各成分的用量可以按比例增減。如果需要標記RNA探針，則需要訂購NTP分開的試劑盒。如果需要得到加帽RNA，則需要加入自備的加帽修飾核苷酸(本公司有各種加帽修飾核苷酸)。
2. 37℃保溫1-2小時。注意：延長保溫時間并不能提高產量。
3. 70℃加熱10分鐘滅活SP6 RNA聚合酶。
4. 取1-3μL電泳檢測轉錄效果。一般1μg DNA可以合成 5-10μg的RNA。
5. 得到的RNA可以放-80℃保存。

若需進一步去除DNA模板，可參考下列操作步驟，但所用試劑需另行購買，本試劑盒不提供。
1.在體外轉錄體系中加入3-5U自備的RNase-free DNase(BTN90903；3-5U/μL)。
2. 37℃保溫15-30分鐘。
3. 補水到100μL。
4. 用等體積(100μL)的Tris飽和酚-lǜ仿抽提一次去除殘留的DNase和RNA聚合酶。
5.在上清中加200μL自備的微量核酸沉淀劑(BTN50903；用前需要搖晃混勻)，振蕩后15000rpm離心3～5分鐘，棄上清。
6. 加入1mL 75%乙醇，震蕩10秒后15000rpm離心3～5分鐘，棄上清。
7. 短暫離心數秒，用槍頭吸棄上清。
8. 晾干半分鐘，所得沉淀即去除DNA模板后的RNA。可溶于RNase-free水中后立即使用或放-80℃長期保存。

疑難解答：
1. 沒有RNA產物。zuì常見原因是模板有RNase污染，可用純化的RNA跟模板DNA一起保溫，再檢測RNA是否降解。還可以增加RNase Inhibitor用量，本試劑盒緩沖液和酶混合液中有RNase inhibitor，如果模板RNase污染嚴重，可能需要用戶補加RNase inhibitor。
2. RNA產量低。zuì常見的原因是DNA模板。在轉錄序列的個和第二個堿基zuì好都是G，在前14個堿基內避免有U存在。
3. RNA長度比預期的短。可能是模板序列中有SP6 RNA聚合酶的終止序列。可以改用SP6體外轉錄試劑盒(啟動子也必須改成SP6啟動子)。
4. RNA長度比預計的長。SP6 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一樣，有不依賴于模板的加尾功能，zuì多有一半的RNA可以帶一個或兩個堿基的尾巴。如果RNA長度比預計的長很多，使用的模板又是質粒DNA，則可能是質粒DNA線性化不徹底。
5. 5′單磷酸還是三磷酸。如果使用GTP，則得到的RNA是三磷酸，體外轉錄時如果保溫時間太長(如12小時)，則有50%的三磷酸會變成單磷酸。如果在轉錄體系中加入GMP，則SP6 RNA聚合酶將優先使用GMP，所得RNA產物中5′端是單磷酸的比例將大大增加。
6. 如何得到帶帽RNA？需加入帶帽NTP類似物即可，本公司提供5種供選擇。

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