SY0578 堿性磷酸酶染色試劑盒
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SY0578 堿性磷酸酶染色試劑盒
- 型 號(hào)：SY0578
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-05
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：1027
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
堿性磷酸酶染色試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，我公司的堿性磷酸酶染色試劑盒品質(zhì)上佳，經(jīng)過多年的開發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括堿性磷酸酶染色試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：堿性磷酸酶染色試劑盒
英文名稱：Alkaline Phosphatase Stain Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0578
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T
堿性磷酸酶，即Alkaline Phosphatase，縮寫AP，該酶在大多數(shù)細(xì)胞類型中均有表達(dá)，但是在胚胎干細(xì)胞（ES）和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）內(nèi)的表達(dá)水平明顯升高；經(jīng)固定的ES和iPS被堿性磷酸酶試劑盒染色后，未分化的細(xì)胞可呈現(xiàn)藍(lán)/紫色，分化的細(xì)胞呈現(xiàn)無色。百奧萊博提供的該試劑盒特異性強(qiáng)、靈敏度高，可對(duì)ES和iPS細(xì)胞分化狀況進(jìn)行較好的評(píng)估。
產(chǎn)品組份：
染色液A————1.25ml×2
染色液B————0.65ml
染色液C————25ml
注意事項(xiàng)
1）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2）使用前請(qǐng)自備：PBS 緩沖液、PBST或TBST、4%多聚甲醛。
3）本試劑盒染色液A、B瓶口若出現(xiàn)少量液體凝固屬正常現(xiàn)象，融化混勻后正常使用即可。
儲(chǔ)存條件：4℃，有效期6個(gè)月。
根據(jù)您的關(guān)注的堿性磷酸酶染色試劑盒，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：
名稱：生物素標(biāo)記dUTP溶液(Biotin-11-dUTP)
貨號(hào)：BTN100920
規(guī)格：50μL
本產(chǎn)品是濃度為1mM的Biotin-11-dUTP。分子式：C28H41N6O17P3SNa3，分子量：927.6。分子結(jié)構(gòu)式圖如下：
Biotin-11-dUTP常用于PCR、缺口平移、cDNA合成、隨機(jī)引物標(biāo)記和引物延伸等方法標(biāo)記DNA。
儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期兩年。
名稱：生物素標(biāo)記UTP溶液(Biotin-16-UTP )
貨號(hào)：BTN151203
規(guī)格：25μL
名稱：隨機(jī)引物法DNA探針標(biāo)記試劑盒
貨號(hào)：BTN90603A
規(guī)格：5次
本試劑盒是基于Feinberg和Vogelstein發(fā)明的隨機(jī)引物標(biāo)記法而開發(fā)出來的即用型DNA探針標(biāo)記試劑盒，標(biāo)記過程由雙鏈DNA熱變性、隨機(jī)引物與單鏈DNA結(jié)合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探針并摻入標(biāo)記的核苷酸三步組成，可用下面的示意圖表示：
本產(chǎn)品對(duì)Feinberg和Vogelstein經(jīng)典方法進(jìn)行了改良。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 提供的標(biāo)記反應(yīng)液整合了除酶和模板外的所有成分，簡(jiǎn)化了反應(yīng)加樣步驟，提高了標(biāo)記反應(yīng)的可重復(fù)性。
2. 使用無外切活性的Klenow exo- DNA聚合酶，已標(biāo)記DNA探針不會(huì)被酶降解。
3.快速，zuì快1小時(shí)即可完成標(biāo)記反應(yīng)。
4. 得到的DNA探針比活性高(如果是同位素，可以達(dá)到109cpm/μg DNA)，檢測(cè)靈敏度高。
5. 所需模版DNA量少(只需要10ng以上即可)，DNA可以是各種形狀(線狀和環(huán)狀)的、也可以是單鏈或雙鏈的，長(zhǎng)度在100bp以上均可。
6. 得到的探針長(zhǎng)度在200-400nt之間，可以用于Southern雜交、Northern雜交、原位雜交、菌落和斑點(diǎn)印跡雜交等。
7. 提供三種標(biāo)記選擇，其中BTN90603A可用于各種同位素標(biāo)記和其他任何非同位素標(biāo)記，但需自備標(biāo)記底物；BTN90603B和BTN90603C可分別用于生物素和地高xīn標(biāo)記，不需自備標(biāo)記底物。
試劑盒組成：
| 成分 | 規(guī)格 |
| 2×A型標(biāo)記反應(yīng)液(自備標(biāo)記物型) | 50μl(僅A型有) |
| 2×B型標(biāo)記反應(yīng)液(生物素型) | 50μl(僅B型有) |
| 2×C型標(biāo)記反應(yīng)液(DIG型) | 50μl(僅C型有) |
| dATP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dTTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dGTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| dCTP,2mM | 10μL(僅A型有) |
| Klenow exo-聚合酶(2U/μL) | 5μl |
| 超純水 | 1ml |
| 說明書 | 1份 |
儲(chǔ)存條件：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
1.在一干凈的硅化的塑料離心管中加入下列成分：
| 成分 | 用量 |
| 模板DNA | 50-150ng |
| 2×標(biāo)記反應(yīng)液(ABC三種之一) | 10μl |
| 超純水 | 補(bǔ)水到15μl |
注意：非同位素標(biāo)記物由于疏水性強(qiáng)，容易與常用的塑料離心管表面非特異性結(jié)合，所以一定要使用硅化的塑料離心管。模板DNA并非越多越好，因?yàn)槟０鍟?huì)在雜交反應(yīng)中跟標(biāo)記的探針雜交，競(jìng)爭(zhēng)性地抑制探針跟靶分子的雜交。
2. 沸水浴5-10分鐘，或在PCR儀上100℃加熱5-10分鐘使DNA模版充分變性，立即放冰上待用。注意：如果PCR儀器不能設(shè)置到100℃，99℃加熱5分鐘也可。
3.高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底，根據(jù)試劑盒類型加入下列成份：
| 試劑盒類型 | 成分及用量 |
| BTN90603A型 |
dATP、dGTP、dCTP各1μl(共3μL，濃度均為2mM) 自備的2mM dTTP/標(biāo)記dUTP混合物(見注)1μL 1μl Klenow exo聚合酶 |
| BTN90603B型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
| BTN90603C型 |
1μl Klenow exo聚合酶 4μl超純水 |
注：上表中的dTTP/標(biāo)記dUTP混合物中dTTP和標(biāo)記的dUTP的總濃度為2mM(在20μL體系中混合液的終濃度為0.1mM，dTTP與生物素或DIG標(biāo)記的dUTP的比例zuì好為65:35)。由于空間阻礙，并非標(biāo)記生物素或DIG標(biāo)記的dUTP越多靈敏度越高，一般dTTP與標(biāo)記dUTP的比例在65：35為zuì佳。但如果使用自備的其他標(biāo)記核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl標(biāo)記的dUTP，則用戶需要自己摸索其與dTTP之間的zuì佳比例，如果使用32P標(biāo)記的dUTP，則比活zuì好為3000Ci/mmol，濃度為好為10uCi/μL，并且不需要加入dTTP。
4. 輕柔吹打混勻。如有液滴沾在管壁上，高速離心數(shù)秒使所有液體集中在管底。
5. 37℃保溫1-20小時(shí)。標(biāo)記效率跟模版量和保溫時(shí)間相關(guān)，具體見下表：
| 模版DNA用量 | 1小時(shí)后探針合成量 | 20小時(shí)后探針合成量 |
| 10ng | 80ng | 900ng |
| 30ng | 150ng | 1.35μg |
| 100ng | 350ng | 1.65μg |
| 300ng | 750ng | 2.2μg |
| 1μg | 1.3μg | 2.6μg |
| 3μg | 1.6μng | 2.6μg |
6. 加1μl自備的0.5M EDTA(pH8.0)終止反應(yīng)，立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要加熱100℃ 5分鐘使DNA探針變性成單鏈，然后直接加入到雜交反應(yīng)液中即可。如果電泳檢測(cè)，標(biāo)記產(chǎn)物將是彌散狀態(tài)。
注意：本方法標(biāo)記核苷酸摻入率高，因此可以不經(jīng)純化直接使用。如果需要純化，注意不要用酚抽提法純化非同位素(生物素、DIG和其他等)標(biāo)記的DNA探針，因?yàn)檫@些標(biāo)記分子疏水性強(qiáng)，能使標(biāo)記的DNA進(jìn)入疏水的有機(jī)相而丟失，但可以用乙醇沉淀和Sephadex G50回收(可另購非同位素探針柱式純化試劑盒)。對(duì)比活高的同位素探針，由于其其不穩(wěn)定，因此應(yīng)該立即使用，不要長(zhǎng)久放置。
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