KFS171 Ca2+ GPCR分析-鈣離子指
- 產品/服務：KFS171 Ca2+ GPCR分析-鈣離子指
- 型 號：KFS171
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1054
產品簡介
Ca2+ GPCR分析-鈣離子指由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科研目的，本品質量穩定，價位合理，需要Ca2+ GPCR分析-鈣離子指等探針標記及檢測產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示：包括Ca2+ GPCR分析-鈣離子指示探針 Fluo-8, AM在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：Ca2+ GPCR分析-鈣離子指示探針 Fluo-8, AM
英文名稱：Fluo-8, AM
產品貨號：KFS171
產品規格：2×50μg
Fluo-2 zuì早是由Roger Tsien 博士發明的鈣離子指示劑Fluo 系列之一，目前，Fluo-3 和Fluo-4 已成熟商品化。然而，Fluo-2 在細胞內比Fluo-4 要更明亮，主要可能是由于大部分細胞對Fluo-2 的加載能力要高于Fluo-4。
Fluo-3 成像涉及到鈣離子信號通路的多個方面，Fluo-3 經常應用在流式細胞術上，如螯合劑光活化、第二信使、神經遞質以及細胞水平的藥理篩選。Fluo-3 在這些應用里之所以能大量運用主要是由于其幾個重要特性：Fluo-3 可以被氬離子激光器488nm 激發，并在與Ca2+結合后，發射熒光很明亮的熒光信號。Fluo-4 是Fluo-3 以兩個氟原子取代氯原子的類似物，這一微小的結構變化使得Fluo-4探針在488nm 激發光下的熒光信號得到增強，信號穩定持續，可以應用于共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、微孔板讀數儀。
Fluo-2、Fluo-3 和Fluo-4 在與Ca2+結合后熒光增強，與紫外激發的探針fura-2 和indo-1 不同，不會發生光譜漂移。熒光光密度在與Ca2+結合后，增強至少100 倍。
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| 貨號 | 名稱 | 規格 |
| BTN90605B | TdT加尾法DNA生物素標記試劑盒 | 5次 |
| BTN151203 | 生物素標記UTP溶液(Biotin-16-UTP ) | 25μL |
| BTN91104A | Denhardt溶液(同位素探針) | 250mL |
| YT031 | 生物素標記DNA探針制備試劑盒(隨機引物法) | 10次 |
| YT032 | 化學發光法生物素標記核酸檢測試劑盒 | 1000cm2 |
| YT359 | 細胞內鈣離子熒光探針(Fluo-3 AM) | 20微升 |
| YT360 | 氯離子熒光探針(MQAE) | 20mg |
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名稱：5′末端同位素標記試劑盒
貨號：BTN131036
規格：20次
本產品為DNA 5′末端標記系統，利用T4 Polynucleotide Kinase(T4多聚核苷酸激酶)和［γ-32P］ATP 對粘性末端或平末端的DNA或RNA的5′末端進行標記反應。原理如下：
產品特點：
1. 使用本試劑盒之前，不需要對 5′末端的磷酸基團進行去磷酸化處理，因為使用的kinase 能使5′末端的磷酸與[γ-32P]ATP的γ-磷酸進行交換。
2. 合成的單鏈或雙寡核苷酸的5′末端游離的OH基團都能通過Kinase反應被標記(或者只是簡單的磷酸化)。
3. 提供的兩種反應液使交換反應和磷酸化反應都能進行，均能得到大于106 cpm/pmol(5′-end)的比活性。
試劑盒組份：
| 成分 | 規格 |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 20μl |
| 5×交換反應緩沖液 | 100μl |
| 10×磷酸緩沖液 | 50μl |
|
Co | 20μl |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一、交換反應
1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
| 自備的5′磷酸化DNA片段 | 14μL(≤5 pmoles的5′末端) |
| 5×交換反應緩沖液 | 5μL |
| [γ-32P]ATP | 5μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 滅菌的超純水 | 補足到25μL |
注：5 pmoles的5′末端約等于0.17μg的長100bp的雙鏈DNA。
3. 37℃反應30分鐘。
4. 70℃加熱5～10分鐘使酶失活。
5. 加入10μl的7 M CH3COONH4(pH4.5)。如使用CH3COONa做乙醇沉淀時使其終濃度達300mM。
6. 加入87.5μl(2.5倍)的冷無水乙醇，-20℃放置30～60分鐘。
7.離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。
注：通過第5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要完全將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用苯酚抽提除去蛋白質時，請在第8 步之后進行。
二、磷酸化反應標記
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/氯fǎng、3 M NaCl 、乙醇、70%乙醇、牛小腸堿性磷酸酶(CIAP)等
2.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
| 自備的DNA片段 | 133μL(≤10μg) |
| 1M Tris-HCl，pH8.0 | 15μL |
| 牛小腸堿性磷酸酶(CIAP，10～20U/μL) | 2μl |
| 滅菌的超純水 | 補足到150μL |
3. 50℃反應30分鐘。
4. 加入150μl的TE 飽和酚/氯fǎng/異戊醇(25：24：1)，充分混勻。
5.離心，取上層(水層)移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入7.5μl的3 M NaCl(zuì終濃度150mM)。
8. 加入375μl(2.5倍量)的冷無水乙醇，-20℃放置30～60分鐘。
9.離心回收沉淀，用 1mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。
10. 使用 20μl的TE Buffer 溶解沉淀。
B. 磷酸化反應(前反應)
1.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
| 自備的DNA片段 | 20.5μL(≤5 pmoles的5′末端) |
| 10×磷酸緩沖液 | 2.5μL |
| [γ-32P]ATP | 1μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 滅菌的超純水 | 補足到25μL |
2. 37℃反應30分鐘。
3.下面的操作與交換反應的第4-8 步操作相同。
三、合成DNA 寡核苷酸的標記
1.在微量離心管中制備下列反應液：
| 成分 | 加入的體積 |
|
Oligo | ≤3μL |
| 10×磷酸緩沖液 | 2.5μL |
| [γ-32P]ATP | 1μL |
| T4 多聚核苷酸激酶(10U/μL) | 1μL |
| 滅菌的超純水 | 補足到25μL |
2. 37℃反應30分鐘。
3.下面的操作與交換反應的第4-8 步操作相同。
四、合成DNA 寡核苷酸的標記
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱(需另購)對于去除未摻入的dNTPs效果很好，它還能大幅減少小于20個堿基的DNA 寡核苷酸和小于20bp的雙鏈DNA的量。使用之前需要在70℃加熱5～10分鐘以使T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于10個堿基的寡核苷酸。
注意事項：
1.緩沖液可在室溫融解。融解后立即置于冰中，使用前充分混勻。
2. 5×交換反應緩沖液于-20℃凍結保存時會有白色渾濁出現，但不影響反應效果。
3.酶切得到的DNA片段需經乙醇沉淀等方法純化。
4. 當用于交換反應的DNA在5 pmoles以上(約1,000bp以上)時，標記效率有時會低于106 cpm/pmol。
5. 如果交換反應所用 DNA低于500bp時，標記效率有時會有所降低。
6. 若不進行放射線標記，僅使用本試劑盒做5′末端磷酸化反應時，反應體系中的［γ-32P］ATP可用5μl的10mM ATP 代替。
7. 磷酸化反應時的［γ-32P］ATP可用［γ-35S］ATP 替代。
使用舉例：
按照使用方法中交換反應和合成DNA 寡核苷酸的標記的實驗操作，取λ-BstP I，λ-Hpa I，λ-EcoT22 I 各3 pmols，用［γ-32 P］ATP 通過正向磷酸化反應或交換反應標記。各DNA片段的放射自顯影結果如下所示：
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