ZN1521 敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測試劑盒Ⅱ
- 產(chǎn)品/服務(wù)：ZN1521 敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測試劑盒Ⅱ
- 型 號：ZN1521
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數(shù)：1036
產(chǎn)品簡介
敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測試劑盒Ⅱ由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測試劑盒Ⅱ等探針標(biāo)記及檢測產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測試劑盒Ⅱ(AP)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：敏感性加強(qiáng)型原位雜交檢測試劑盒Ⅱ(AP)
產(chǎn)品貨號：ZN1521
產(chǎn)品規(guī)格：100T
保存：置4℃。
工作量：100 張切片。
有效期：一年。
所謂原位雜交是指借助于核酸分子雜交的方法，在顯微鏡水平檢測和定位特異的核苷酸片段。現(xiàn)在原位雜交已成為在分子水平研究腫瘤和遺傳性疾病的發(fā)生，發(fā)展和調(diào)控等根本性問題的有力工具，其作用是免疫組化所無法代替的。具有敏感性特高，操作簡便和結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。該試劑盒分為兩種，一種為過氧化物酶檢測，一種為堿性磷酸酶檢測系統(tǒng)。 用于 mRNA的雜交。僅適于地gāo辛標(biāo)記的寡核苷酸探針，不推薦使用每個(gè)探針分子僅標(biāo)記一個(gè)地gāo辛的寡核苷酸探針。
如果使用cDNA探針，應(yīng)在雜交之前變性探針。
試劑盒中內(nèi)容：
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；
2．預(yù)雜交液 2ml；
3．寡核苷酸探針雜交稀釋液 2ml；
4．封閉液 5ml;
5.生物素化鼠抗地gāo辛 5ml;
6.SABC-AP 5ml
7．BCIP/NBT0.5ml
8．核固紅6ml
9．水溶性封片劑 6ml
用戶自備試劑：原位雜交專用蓋玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油
緩沖液(3%檸檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,0.5M TBS)
一．細(xì)胞和冰凍切片
準(zhǔn)備工作：緩沖液的配備
3%檸檬酸——100ml 蒸餾水中加檸檬酸(C6H8O7·H2O)3g,PH2.0 左右。
2×SSC——1000ml 蒸餾水中加氯化鈉 17.6g，檸檬酸三鈉(C6H5O7Na3·2H2O，分子量 294)8.8g。
0.5×SSC——300ml 蒸餾水加 100ml 2×SSC 即可。
0.2×SSC——270ml 蒸餾水加 30ml 2×SSC 即可。
20%甘油——20ml 甘油加 80ml 蒸餾水即可。
0.5 M TBS——1000ml 蒸餾水加氯化鈉 30g,TRIS 1.2g 純乙酸 0.4-0.5ml,PH7.2-7.6。
0.01 M TBS(PH9.0-9.5)配法：1000ml 蒸溜水中加 NaCl 9g,Tris 1.2g
操作程序：
注意：zuì重要的是及時(shí)固定，并在固定液中加入 0.1%的DEPC 處理，以抑制 RNA酶對 mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度 10-20μM。
2．細(xì)胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為37℃和 5%的CO2，所用培養(yǎng)基為Dulbecco 基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長好后 0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3．培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.4)，含有 1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存 2 周以上。
4．暴露 mRNA 核酸片段：切片上滴加 3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加 2 滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化 5—120 秒鐘。有時(shí)也可以不消化。0.5M TBS洗3次×5
分鐘。蒸餾水洗1次。
5.預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加 20%甘油 20ml 以保持濕度。 按每張切片 20μl加預(yù)雜交液。恒溫箱 37—40℃2—4 小時(shí)。吸取多余液體，不洗。
6．雜交——用雜交稀釋液 稀釋地gāo辛標(biāo)記的寡核苷酸探針，濃度一般 0.5-2μg/ml。按每張切片加 20μ ι 雜交液。將原位雜交專用蓋玻片的保護(hù)膜揭掉后，蓋在切片上。恒溫箱 37—40℃雜交過夜。
7．雜交后洗滌：去掉蓋玻片，30—37℃左右水溫的2×SSC洗滌 5分鐘×2次；0.5×SSC洗滌15分鐘×1次；0.2×SSC洗滌 15分鐘×1次。必要時(shí)可重復(fù) 0.2×SSC洗滌 1次。
8．滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗。
9．滴加生物素化鼠抗地gāo辛：37℃60分鐘或室溫 120分鐘。0.5M TBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
10.滴加 SABC—AP：37℃30分鐘。0.5M TBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
11.BCIP/NBT 顯色：BCIP/NBT(×20)按 1：20的比例用 0.01M TBS(PH9.5)稀釋，混勻。顯色液加至標(biāo)本上。一般 30—37℃顯色 20-30分鐘。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。充分水洗。
12.必要時(shí)核固紅復(fù)染 5-15分鐘，水洗。
13.水溶性封片劑封片。
二．石蠟切片
如果有條件的話，應(yīng)盡可能地采用新鮮標(biāo)本。標(biāo)本離體后，及時(shí)予以固定。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.4)，含有 1/1000 DEPC。標(biāo)本較大時(shí)用刀片切成厚度不超過 4mm的小塊，固定 1 小時(shí)即可，較大的標(biāo)本固定不要超過 2 小時(shí)。某些組織對過度固定尤其敏感，如動(dòng)物大腦，固定時(shí)間一定不要超過 1 小時(shí)。
1．常規(guī)脫水、浸蠟、包埋。切片厚度 6-8μm。
2．玻片的處理：一般采用多聚賴氨酸或APES。
3．石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟至水。
4．暴露 mRNA 核酸片段：切片上滴加 3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加 2 滴濃縮型胃蛋白酶，混勻)，37℃或室溫消化 3--30分鐘(視標(biāo)本新舊、厚薄自行調(diào)整)。用戶可以比較不同的消化時(shí)間，例如 10分鐘，20分鐘，30分鐘，以找到zuì佳的消化時(shí)間。0.5M TBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
其余步驟和冰凍切片 6-13 步相同。
結(jié)果觀察：
陽性細(xì)胞胞漿著色呈紫藍(lán)色。
注意事項(xiàng)：
如果有少量的細(xì)胞核著色屬于正常情況；如果出現(xiàn)大量的細(xì)胞核著色，往往和標(biāo)本固定時(shí)間過長有關(guān)，應(yīng)重新處理標(biāo)本。有其它明顯的非特異性染色現(xiàn)象時(shí)，可以用預(yù)雜交液對含探針的雜交液進(jìn)行稀釋，一般稀釋2—5倍。
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