BTN70602 DNA快速連接試劑盒
- 產品/服務：BTN70602 DNA快速連接試劑盒
- 型 號：BTN70602
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1033
產品簡介
北京百奧萊博供應的DNA快速連接試劑盒用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多DNA快速連接試劑盒等克隆與表達產品請聯系我司咨詢訂購。...
產品詳細介紹
特別提示：包括DNA快速連接試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：DNA快速連接試劑盒
英文名稱：Rapid DNA Ligation Kit
產品貨號：BTN70602
產品規格：100次
DNA連接反應通過T4連接酶催化雙鏈DNA的3′-OH和5′-P形成磷酸二脂鍵而將DNA共價連接在一起。被連接的DNA末端可以是粘末端(例如限制性切割EcoR I產生的末端)，也可以是平末端(限制性切割Sma I產生的末端)。Pheiffer等人發現PEG可以促進T4 DNA連接酶催化的連接反應[NAR，11，7853-7871，1983]，連接反應只需十分鐘即可完成。
產品特點：
1.超快，整個連接反應只需要室溫5分鐘左右，反應液可以直接用于轉化實驗。
2.，溶液配方經過優化，每ug 插入DNA連接轉化得到的重組子可達107左右。
3. 既可用于平末端連接，也可用于粘末端連接，包括PCR產物與T載體的連接。
4. 簡單，客戶只需要提供載體和插入片段即可。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 500μl |
| 溶液B | 100μl |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一：連接反應
1.在無菌的離心管中嚴格按下表順序加入列各成分(以10μl 體系為例):
| 成分 | 陰性對照管 | 樣品管 |
| 溶液A | 5μl | 5μl |
| 插入片段(自備) | - | 0.2-0.5μg(注) |
| 載體(自備) | 50ng | 50ng |
| 無菌水 | 補水到9μL | 補水到9μL |
注：插入DNA片段的摩爾數zuì好是載體的3-10倍，如果載體長度為3000bp，則所需插入DNA片段折合成重量(ng)＝(插入DNA片段bp 數×50 ng×N)÷3000bp。N就是自己選定的插入DNA片段與載體的摩爾比。
2. zuì后在每管中加入1μl溶液B，輕柔吹打混合均勻后用微量離心機將液體全部甩到管底。
3.室溫放置至少5分鐘，zuì長可以放置過夜。
4. 70℃保溫10分鐘。此步可以滅活有關的酶，否則轉化效率有所降低。
5. 根據使用的轉化方法，每管各取適量用于轉化實驗，余下的放置在-20℃保存。
二：細菌轉化及篩選(僅供參考，本產品不提供相關試劑)
6. 將100μl轉化效率在1×108 cfu/μg以上的感受態細胞于冰上解凍。
7. 取5-10μl連接產物加入到感受態細胞中，輕輕旋轉幾次以混勻。
8.在冰上放置30分鐘。
9. 將離心管放42℃熱休克90秒，然后快速將其轉移到冰浴中放置1～2分鐘。
10. 每管中加900μl LB培養基，37℃振蕩培養1小時復蘇細胞。
11. 將100μl 復蘇涂布到含Amp的LB 瓊脂平板上(根據載體情況也可能需要加上X-gal和IPTG)。
12.室溫4,000rpm離心剩余的900μl 復蘇細胞5分鐘，棄去800μL上清，用剩余100μl培養基重懸細胞并涂布到含Amp的LB 瓊脂平板上(可加X-gal、IPTG)。
13. 將平板置于室溫直至液體被吸收。此步非常重要，否則培養板將在37℃排除水分，細菌將隨水在培養基上到處游動，不能形成單個菌落。
14. 倒置平皿，于37℃培養，12~16小時后可出現菌落。一般情況下陽性對照組會有上千個菌落(100μl轉化液產生的菌落數×10)，自聯對照只有少數幾個菌落，樣品組的菌落數取決于PCR 回收片段的質量。
15. 按常規方法篩選重組子。
根據您的關注的DNA快速連接試劑盒，您可能還對以下產品有需求：
名稱：大腸桿菌DH10B化學感受態細胞
貨號：BTN140374
規格：0.1mL*10
本產品是采用大腸桿菌DH10B菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可用于DNA的化學轉化。
產品特點：
1. 使用 pUC19質粒檢測，轉化效率可達10，-80℃保存幾個月轉化效率不發生改變。
2.可用于轉化150Kb大小的質粒，可用于藍、白斑篩選。
3. DH10B菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG
4. 本產品質量穩定，使用方便，質優價廉。
儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等
使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以100μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含有相應抗生素的LB 固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。
注意事項：
1、涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。
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