GL1176 堿性凝膠加樣緩沖液(6×)
- 產(chǎn)品/服務(wù)：GL1176 堿性凝膠加樣緩沖液(6×)
- 型 號(hào)：GL1176
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：981
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
北京百奧萊博供應(yīng)的堿性凝膠加樣緩沖液(6×)用于科研目的，我公司的堿性凝膠加樣緩沖液(6×)品質(zhì)上佳，經(jīng)過(guò)多年的開(kāi)發(fā)生產(chǎn)，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購(gòu)。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括堿性凝膠加樣緩沖液(6×)在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：堿性凝膠加樣緩沖液(6×)
產(chǎn)品貨號(hào)：GL1176
產(chǎn)品規(guī)格：5ml
用途：
堿性瓊脂糖凝膠電泳
注意事項(xiàng)：
主要由氫氧化鈉、EDTA、Ficoll400、溴甲酚綠、二甲苯青等組成。
儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月
根據(jù)您的關(guān)注的堿性凝膠加樣緩沖液(6×)，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：
| 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
| BTN90317 | 一站式DNA尿素-PAGE電泳套裝 | 30次 |
| BTN151103 | 超級(jí)電泳液 | 100mL |
| BTN3690A | 紅色DNA上樣液，6× | 10mL |
| BTN90602H | DNA marker(φX174 DNA/HaeIII) | 50次 |
| BTN70503T | DNA marker(250-15000bp) | 50次 |
| BTN120654B | Southern專用DNA Marker(DIG標(biāo)記) | 20次 |
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關(guān)注堿性凝膠加樣緩沖液(6×)，的同時(shí)，為您推薦更多您可能感興趣的產(chǎn)品：
名稱：一站式RNA電泳套裝
貨號(hào)：BTN60904
規(guī)格：10次
本品是包括瓊脂糖、去離子甲醛、RNA上樣液、電泳液等在內(nèi)的RNA電泳套裝，專門用于RNA電泳分析。可以進(jìn)行至少10次mini變性膠電泳。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶不需要自己進(jìn)行RNase 滅活、高壓滅菌、pH調(diào)節(jié)等操作。
2.與Northern雜交等后續(xù)反應(yīng)兼容。
產(chǎn)品組成：
| 成分 | 規(guī)格 |
| 瓊脂糖 | 5g |
| 超純水 | 250ml |
| 甲醛 | 60ml |
| RNAload(含EB) | 0.5ml |
| RNAep，10× | 100ml |
| 說(shuō)明書 | 1份 |
儲(chǔ)存條件：常溫運(yùn)輸和保存，但收到貨后RNAload 需要4℃保存，RNAep，10×一旦打開(kāi)需要-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
注意：所有器皿(三角瓶，電泳槽，槍頭等)均需去除RNase。強(qiáng)烈推薦使用本公司的的固相RNase 清除劑。
一、配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%，100mL)
1.在三角瓶中加入下列成份：瓊脂糖 1.2-1.5g；DEPC水 87mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后，加入10mL 10×RNAep(10×RNAep 就是10×MOPS緩沖液，其瓶子一旦打開(kāi)，就很容易產(chǎn)生污染細(xì)菌，細(xì)菌大量繁殖后會(huì)釋放大量 RNase，所以剩下的10×RNAep zuì好-20℃放置)。
3. 待膠冷卻至 60℃左右，再加下列成份：甲醛 3.0mL；自備EB(10mg/mL)2-4μL
注意：由于本試劑盒提供的RNAload中含EB，所以也可以不加EB，但效果較差。如果使用自備的其他染料，如SYBR Green I，則不能同時(shí)使用其他染料，包括含EB的RNAload，用戶需要另購(gòu)不含EB的RNAload)。
4. 混勻后倒膠，凝固半小時(shí)后即可以使用。
二、配制電泳液
5. 將RNAep 用DEPC 水稀釋十倍后即成電泳液，所需要的體積根據(jù)使用的電泳槽決定。
三、變性RNA樣品
6.在一干凈的離心管中將5-10μL RNA和15μL RNAload 混合，50-60℃保溫10分鐘后冰浴5-10分鐘，直接上樣。注意：每一泳道至多可分析30μg RNA，通常用10-20μg 總RNA進(jìn)行Northern雜交，可以檢測(cè)高豐度mRNA(占mRNA 總量的0.1%以上)；如待測(cè)RNA含量微，每個(gè)泳道需加0.5-3.0μg poly(A)+ RNA。
四、電泳
7.電泳時(shí)，將凝膠預(yù)電泳5 min(電壓為5 V/cm)。隨后加樣品和分子量對(duì)照(如果有的話)，以3－4 V/cm的電壓電泳，直至染料遷移至膠下游的3/4處。
8.電泳結(jié)束后，在300nm 紫外燈下拍照。
五、后續(xù)處理
9. 按標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行Northern雜交等后續(xù)處理。
使用效果：
圖注: 用本產(chǎn)品電泳兔全血總RNA效果圖。10μL 總RNA與15μL RNAload 混合后在甲醛瓊脂糖變性膠上電泳0.5小時(shí)，直接在紫外燈下觀察并照相。
疑難解答：
Q：RNA電泳為何zuì好使用RNAep，不要使用DNA電泳液TAE或TBE？
A：一是因?yàn)镽NAep 經(jīng)過(guò)去RNase處理，而一般實(shí)驗(yàn)室使用的TAE或TBE都沒(méi)有經(jīng)過(guò)去RNase處理，故有可能含RNase，使樣品RNA 降解。即使要滅活TAE或TBE中的RNase 也十分麻煩，因?yàn)镈EPC 不能處理含Tirs的緩沖液；二是TEB含有硼酸，硼酸是研究多羥基醇和糖的經(jīng)典試劑，它能與RNA中含多羥基的核糖反應(yīng)生成糖硼酸絡(luò)合物，故電泳時(shí)RNA 帶型十分彌散。在一定濃度范圍內(nèi)，RNA分子間還能通過(guò)硼酸形成分子間復(fù)合物，出現(xiàn)電泳時(shí)各種RNA以一條帶的形式出現(xiàn)的現(xiàn)象。所以RNA電泳時(shí)要避免使用含硼酸的緩沖液。使用TAE效果雖然比TBE 稍好，但文獻(xiàn)報(bào)道(BioTechniques 2000，28:414-415)，它不能分離某些大小不同的RNA分子。
Q：上樣孔里的紅色熒光物一定是污染的基因組DNA 嗎？
A：不是。用TAE或TBE電泳液和非變性膠電泳RNA時(shí)容易產(chǎn)生此現(xiàn)象，初步研究發(fā)現(xiàn)大部分紅色熒光物是變性不充分的單鏈RNA通過(guò)堿基互補(bǔ)或通過(guò)硼酸絡(luò)合(如果使用TBE作電泳液的話)形成的復(fù)合物，加RNase處理后，這些紅色熒光物一般會(huì)消失。為避免此現(xiàn)象，建議zuì好使用甲醛變性膠電泳。如果需要使用非變性膠，也必須在上樣前使RNA變性。
使用百奧萊博優(yōu)化的上樣/變性/染色三用溶液RNAload可以使RNA在非變性膠上電泳時(shí)也有較好分辨率。使用非變性膠時(shí)，可以使用TAE或超快電泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE緩沖液，因?yàn)門BE中的硼酸能與RNA的多羥基形成復(fù)合物，RNA 很難形成銳利的條帶。
Q：如何確認(rèn)和去處除污染的基因組DNA？
A：如果懷疑有DNA污染，可以用RNase處理RNA樣品，然后再電泳。如果上樣孔里的紅色熒光物不消失，則表示是基因組DNA污染。進(jìn)一步確認(rèn)可以使用PCR擴(kuò)增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA去除劑DNAScavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有殘留的RNase污染，所以必須嚴(yán)格按照廠家提供的使用手冊(cè)進(jìn)行操作。
Q：為何我的植物RNA樣品有4-5 條帶？
A：部分植物組織有葉綠體等質(zhì)體，而葉綠體有核糖體，所以也有其rRNA。
葉綠體的rRNA跟細(xì)胞漿里面核糖體的rRNA大小不同，所以一般會(huì)多出兩條帶(共4 條rRNA 條帶)。小的tRNA和5S rRNA 有時(shí)可見(jiàn)，有時(shí)不可見(jiàn)，取決于回收效率。
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