陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑由北京百奧萊博供貨并提供相關(guān)技術(shù)服務(wù)支持，本品用于科研目的，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑等克隆與表達產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑
英文名稱：Cationic Liposome Transfection Reagent
產(chǎn)品貨號：WH2000
產(chǎn)品規(guī)格：750μl|2×750μl

本制品是一種適合于把核酸（質(zhì)粒、RNA、DNA、siRNA等）轉(zhuǎn)染到真核細胞的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑。

本制品不含動物源性成分，可以在含血清培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染，適合大多數(shù)細胞系類型，并針對于部分難轉(zhuǎn)染細胞（如干細胞、原代細胞）的轉(zhuǎn)染特點進行優(yōu)化。

產(chǎn)品特點：
1．更加廣泛的細胞模型：本轉(zhuǎn)染試劑經(jīng)廣泛的細胞系驗證，適合大多數(shù)細胞系，包括貼壁細胞、懸浮細胞和部分原代細胞和干細胞來源的細胞。
2．更高的轉(zhuǎn)染效率：在多種細胞中，本轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率更高。
3．更低的細胞毒性：保證轉(zhuǎn)染后的細胞正常代謝，準確呈現(xiàn)細胞生物學(xué)狀態(tài)。
4．操作簡便快速：方便快捷的快速優(yōu)化protocol，無需洗滌和更換培養(yǎng)基。

本轉(zhuǎn)染試劑適用細胞：
CHO-S（adherent) hamster ovary
COS-1 monkey kidney
CHO-K1 hamster ovary
COS7-L monkey kidney
CHO-K1 hamster ovary
293H human kidney
293F human kidney
293T human kidney
HeLa human cervical cancer
Vero monkey kidney
NIH-3T3 mouse embryo fibroblast
MCF7 human breast cancer
A549 human lung carcinoma
Hep G2 human liver cancer
Human fibroblast cells
New born foreskin fibroblasts
Human neural stem cell

快速轉(zhuǎn)染方案：
以24孔板培養(yǎng)貼壁細胞為例，如使用其它培養(yǎng)板，應(yīng)根據(jù)轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整轉(zhuǎn)染試劑用量，具體可參見表1。

DAY1----轉(zhuǎn)染實驗準：
1．轉(zhuǎn)染前一天，取適當數(shù)量的細胞鋪板在含血清培養(yǎng)基的24孔板中，以使細胞密度在轉(zhuǎn)染當天達到70%-90%。對于大多數(shù)細胞株來說，在500μl的含血清培養(yǎng)基中鋪板0.75～8.0×10⁵細胞量即可滿足實驗要求。
2．在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞過夜。（懸浮細胞也可以應(yīng)用此說明書進行轉(zhuǎn)染優(yōu)化實驗，但依據(jù)細胞數(shù)量的多少，可能需要更高的DNA濃度。）

DAY2----轉(zhuǎn)染實驗：
1．轉(zhuǎn)染實驗開始前請將轉(zhuǎn)染試劑放置至室溫，輕彈混勻。
2．溶解DNA溶液至室溫，輕彈混勻。
3．制備DNA/轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物
①在U或V型底無菌離心管中加入平衡至室溫的無血清培養(yǎng)基（推薦使用OptiMEM?)和1μg的DNA溶液，至終體積為100 μl，輕彈混勻。
②向①中稀釋的100 μl DNA溶液中加入3 μl的本轉(zhuǎn)染試劑，vortex震蕩2-3 s以徹底混勻DNA/轉(zhuǎn)染復(fù)合物。
③將上述制備的DNA/轉(zhuǎn)染復(fù)合物室溫靜置孵育10-15min。
④將DNA/轉(zhuǎn)染復(fù)合物轉(zhuǎn)移至細胞培養(yǎng)基中，24孔板每孔加入12.5-50 μl的DNA/轉(zhuǎn)染混合液，輕輕混勻（24孔板每孔細胞培養(yǎng)基500μl）。
⑤將加入轉(zhuǎn)染混合液的細胞在CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)，無須更換培養(yǎng)基（在4-5h后更換培養(yǎng)基也不會降低轉(zhuǎn)染活性）。
⑥對瞬時轉(zhuǎn)染來說，在細胞中加入DNA/轉(zhuǎn)染混合液24-72 h后，可通過分析報告基因活性，檢測轉(zhuǎn)染效率。對穩(wěn)定表達細胞系，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細胞按1:10或更高的稀釋比例傳代至新培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)一天后加入篩選抗生素，進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。
注：配制的DNA/轉(zhuǎn)染復(fù)合物的總體積不能低于20 μl，轉(zhuǎn)移至細胞培養(yǎng)基的DNA/轉(zhuǎn)染復(fù)合物的體積不能低于1 μl。

優(yōu)化實驗：
為了獲得zuì高的基因表達量和zuì低的細胞毒性，使轉(zhuǎn)染效率達到zuì優(yōu)，確定zuì佳轉(zhuǎn)染條件是必不可少的步驟。細胞的數(shù)量和培養(yǎng)皿型號一般已定，所以本轉(zhuǎn)染試劑和DNA的用量是進行轉(zhuǎn)染條件優(yōu)化的zuì重要的兩個參數(shù)。對于不同型號的培養(yǎng)板，推薦使用的轉(zhuǎn)染試劑和DNA用量見表1。

表1：不同的培養(yǎng)板條件下每孔添加試劑的建議劑量

培養(yǎng)板類型	培養(yǎng)基體積	質(zhì)粒DNA	無血清培養(yǎng)基體積	轉(zhuǎn)染試劑體積
96-well	100μl	50-200ng	25μl	0.1-0.6μl
24-well	500μl	0.125-1μg	50μl	0.5-5μl
12-well	1ml	0.5-2μg	100μl	1-10μl
6-well	2ml	1-4μg	250μl	2-20μl
60mm	5ml	2-8μg	500μl	12-50μl
100mm	10ml	23-36μg	1.5ml	24-100μl

注：對于96孔板來說，應(yīng)該準備的DNA/轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物的zuì小體積為20 μl。為了便于添加更低劑量的轉(zhuǎn)染試劑，應(yīng)利用無菌的組織培養(yǎng)基配制10×稀釋的本轉(zhuǎn)染試劑，然后添加1-6 μl 10×轉(zhuǎn)染試劑到DNA溶液中，制備成終體積為20 μl的DNA/轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物。（稀釋后的本轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)配現(xiàn)用，不宜保存）

優(yōu)化實驗操作步驟：
以24孔板培養(yǎng)貼壁細胞為例，如使用其它培養(yǎng)板，應(yīng)根據(jù)轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整轉(zhuǎn)染試劑用量。（懸浮細胞也可以應(yīng)用此說明書進行轉(zhuǎn)染優(yōu)化實驗，但依據(jù)細胞數(shù)量的多少，可能需要更高的DNA濃度。）

DAY1----轉(zhuǎn)染實驗準備：
1．轉(zhuǎn)染前一天，取適當數(shù)量的細胞鋪板在含血清培養(yǎng)基的24孔板中，以使細胞密度在轉(zhuǎn)染當天達到70%-90%。對于大多數(shù)細胞株來說，在500μl的含血清培養(yǎng)基中鋪板0.75～8.0×10⁵細胞量即可滿足實驗要求。
2．在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細胞過夜。

DAY2----轉(zhuǎn)染實驗：
1.轉(zhuǎn)染實驗開始前請將轉(zhuǎn)染試劑放置至室溫，輕彈混勻。
2.溶解DNA溶液至室溫，輕彈混勻。5% CO2培養(yǎng)箱，37℃培養(yǎng)細胞24-72 h，進行后續(xù)實驗或檢測操作向離心管中加入OptiMEM?和1μg的DNA溶液，至終體積為100 μl加入3 μl的本轉(zhuǎn)染試劑Votex振蕩混勻2-3 s，
室溫靜置孵育10-15min 24孔板每孔加入12.5-50 μl DNA/轉(zhuǎn)染混合液。
3.制備DNA/轉(zhuǎn)染復(fù)合物
①在無菌的U或V型底離心管中，以300 μl平衡至室溫的無血清培養(yǎng)基（推薦使用OptiMEM?）分別溶解0.75,1.5,3和6 μg DNA，分別制備終濃度為2.5、5、10和20 μg/ml的DNA溶液，并將4個不同濃度的DNA溶液分別分裝至5個離心管中，每管50 μl（這個過程需要大約20支離心管）。
②在上述4種不同DNA濃度的5個離心管中分別添加1、1.5、2、2.5和3 μl的本轉(zhuǎn)染試劑，立即輕輕震蕩或瞬時渦旋混勻2-3 s，室溫靜置孵育10 min。
③將上述配置的不同DNA/轉(zhuǎn)染試劑比例的轉(zhuǎn)染混合液轉(zhuǎn)移至細胞培養(yǎng)基中，24孔板每孔加入50 μl的DNA/轉(zhuǎn)染試劑混合液（24孔板每孔細胞培養(yǎng)基500μl），輕輕混勻（每孔中DNA和本轉(zhuǎn)染試劑用量如圖1所示）。
圖1.24孔板篩選轉(zhuǎn)染試劑與DNA配比的優(yōu)選法。

注：對于上述的4種濃度DNA溶液（2.5、5、10、20 μg/ml），依次添加5種不同濃度的本轉(zhuǎn)染試劑（1、1.5、2、2.5、3 μl)，以此來確定轉(zhuǎn)染效率zuì高（zuì高的基因表達量/zuì低的細胞毒性)的本轉(zhuǎn)染試劑與DNA配比。A，DNA；B，轉(zhuǎn)染試劑；BLANK，細胞對照；ControⅠ，0.5 μg A；ControⅡ，0.5 μl B；ControⅢ，無血清培養(yǎng)基。
④在5%CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24-48 h，無須更換培養(yǎng)基（在4-5h后更換培養(yǎng)基也不會降低轉(zhuǎn)染活性）。
⑤對瞬時轉(zhuǎn)染來說，在細胞中加入DNA/轉(zhuǎn)染試劑混合液24-72 h后，檢測報告基因活性。對穩(wěn)定表達細胞系，在開始轉(zhuǎn)染一天后將細胞按1:10或更高的稀釋比例傳代至新培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)一天后加入篩選抗生素，進行穩(wěn)定表達需要數(shù)天或數(shù)周。

推薦優(yōu)化指標：
1.一般來說，隨著本轉(zhuǎn)染試劑使用量的增加，基因的表達水平會隨之升高，達到穩(wěn)定表達水平后開始衰減。但基因的表達水平也會隨著進入細胞的質(zhì)粒數(shù)量的增加而增高，所以在穩(wěn)定表達時基因的表達水平可能已經(jīng)降低。
2.DNA的濃度直接影響轉(zhuǎn)染實驗的細胞毒性，不同細胞類型有不同DNAzuì佳轉(zhuǎn)染濃度。如果出現(xiàn)細胞毒性，則應(yīng)降低DNA濃度或直接減少DNA/轉(zhuǎn)染試劑的使用量。

對轉(zhuǎn)染效果評價的建議：
評估一種轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效果，必須考慮一個轉(zhuǎn)入基因過表達后引起細胞毒性的可能性。因此在優(yōu)化轉(zhuǎn)染效率時必須觀察細胞毒性變化，細胞形態(tài)學(xué)的改變是細胞毒性的主要檢測指標之一。
1.觀測與轉(zhuǎn)染毒性相關(guān)的細胞形態(tài)學(xué)變化
①對照組細胞在轉(zhuǎn)染后24-48 h內(nèi)應(yīng)該達到融合狀態(tài)，并且沒有或者僅有較小的形態(tài)學(xué)應(yīng)激變化。三組對照細胞應(yīng)同時評估該指標。
②轉(zhuǎn)染效果應(yīng)當在可見細胞毒性和生長速率兩方面進行評估。細胞邊緣光滑度是可見細胞毒性的一個顯著指標；另外，細胞間距如果與對照組細胞相比出現(xiàn)明顯擴大，則說明細胞生長速率出現(xiàn)下降。
③注意開始導(dǎo)致細胞形態(tài)學(xué)變化的轉(zhuǎn)染試劑的體積。
④若沒有觀察到細胞形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)當測定報告基因與轉(zhuǎn)染試劑劑量之間的關(guān)系曲線。劑量響應(yīng)曲線顯示的形態(tài)應(yīng)激改變通常比生化領(lǐng)域檢測到的細胞毒性要早。
2.降低細胞毒性
①減少DNA/轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物的添加量通常可以降低細胞毒性。以24孔板為例，可以添加12.5～25 μl的復(fù)合物與50 μl的復(fù)合物比較細胞毒性的大小。
②由于DNA/轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物中DNA的比例是引起細胞毒性的主要因素，建議降低復(fù)合物中DNA濃度。
③減少轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物與細胞的作用時間。在添加轉(zhuǎn)染復(fù)合物4-24 h后更換新鮮培養(yǎng)基。
3.提高基因表達量
適當增加轉(zhuǎn)染復(fù)合物的劑量或提高轉(zhuǎn)染復(fù)合物中DNA濃度來提高基因的表達量。

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名稱：單細胞裂解液(RNA提取)
貨號：BTN130804
規(guī)格：1mL
本產(chǎn)品為單細胞RNA提取專用裂解液，本裂解液經(jīng)多次優(yōu)化，含有多種去污劑、變性劑和鹽，可有效抑制核酸酶在裂解過程中對核酸的破壞，維持核酸結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定含有常用。純化所得RNA可用于測序、單細胞PCR等實驗。本產(chǎn)品足夠使用200次以上。

儲存條件：低溫運輸，4℃保存，有效期兩年。

名稱：大腸桿菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIPL化學(xué)感受態(tài)細胞
貨號：BTN140378
規(guī)格：10*100μl
本產(chǎn)品來源于Stratagene公司的BL21-Gold菌株，缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶，從而減少對重組蛋白的降解，補充大腸桿菌缺乏的4 種稀有密碼子(AGA、AUA、CCC、CUA)對應(yīng)的tRNA(argU、ileY、proL、leuW)，提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-的真核基因在原核系統(tǒng)中的表達水平。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3 區(qū)(DE3 區(qū)含有T7 噬菌體RNA聚合酶)，可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達，同時具有四環(huán)素，氯霉素，鏈霉素，壯觀霉素抗性。本產(chǎn)品由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高達108cfu/μg。
菌株基因型為：F- ompT hsdS(rB-mB-)dcm+ Tetr galλ(DE3)endA Hte [argU proLCamr] [argU ileY leuW Strep/Specr]。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。

自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養(yǎng)基等

使用方法：
1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。
以下實驗以100μl感受態(tài)細胞為例。
2. 待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。
5. 根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞，加到含有相應(yīng)抗生素的LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

注意事項：
1、涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。
4. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選(0.1-2mM 均可)。
5. 為獲得需要量的蛋白，zuì佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

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貨號	名稱	規(guī)格
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BTN121004	pression/BTN121004.html" target="_blank">大腸桿菌Rosetta(DE3)化學(xué)感受態(tài)細胞	0.1mL*10
BTN80910	pression/BTN80910.html" target="_blank">X-gal溶液	10mL
BTN120690	pression/BTN120690.html" target="_blank">紅霉素溶液	10mL
BTN120687	pression/BTN120687.html" target="_blank">環(huán)孢霉素A	1mL
YT449	pression/YT449.html" target="_blank">ISRE熒光素酶報告基因質(zhì)粒(干擾素激活反應(yīng)元件)	1μg
YT465	pression/YT465.html" target="_blank">C端DsRed標簽融合蛋白質(zhì)粒(紅色熒光蛋白)	1μg

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