KFS337 細胞活力
- 產品/服務：KFS337 細胞活力
- 型 號：KFS337
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長期有效
- 瀏覽次數：1021
產品簡介
細胞活力的品牌是百奧萊博，是優質的細胞凋亡與增殖產品，本制品用于生化實驗研究等領域，本品質量穩定，價位合理，需要細胞活力等細胞凋亡與增殖產品的客戶，請到我公司官網聯系我們。...
產品詳細介紹
特別提示：包括細胞活力(活死細胞染色)檢測試劑盒(Calcein AM，PI法，適用于FACS、FM)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
產品名稱：細胞活力(活死細胞染色)檢測試劑盒(Calcein AM，PI法，適用于FACS、FM)
英文名稱：Live & Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Cells 說
產品貨號：KFS337
產品規格：1000T
本試劑盒為動物細胞死活檢測提供了雙色熒光染色方法。本試劑盒采用兩種廣泛常用的熒光探針，通過檢測細胞內酯酶活性和質膜完整性兩個方面反映細胞活力。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、熒光多孔板、掃描儀、流式細胞儀以及其他熒光檢測系統。本試劑盒可以應用于大多數的真核哺乳動物細胞，包括貼壁細胞核某些組織，但不適用與細菌、酵母。該方法更快捷安全且靈敏度更高。
原理：在鈣黃素AM 存在活細胞內時，其特點就是由于胞內無所不在的酯酶活性作用，由幾乎無熒光、具有細胞膜透性的鈣黃素AM生成具有強烈熒光信號的綠色熒光物質（Ex/Em：495nm/520nm）。而對于受損的細胞膜來說，碘化丙啶(PI)可以傳過進入細胞，與核酸結合，熒光信號從而放大40 倍，產生一個明亮的紅色熒光信號的死細胞（Ex/Em：530nm/620nm）。
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名稱：XTT細胞增殖與細胞毒性檢測試劑盒
貨號：BTN140635
規格：500次
XTT能被活細胞里的線粒體脫氫酶降解而產生橙黃色水溶性的甲臜，通過測定甲臜的光譜吸收，進而可以測定細胞的增殖情況。XTT與MTT同屬四唑氮衍生物，它們檢測細胞活性的反應原理相似，原理圖如下：
產品特點：
1．盒靈敏度，可檢測低細胞密度樣品，檢測結果的重復性優于MTT。
2．操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時，無需洗滌或收獲細胞，免去溶解步驟。
3．無放射性。不需要配制液閃混合物，也不需要處理廢棄物。
4．與MTT相比，使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲基產物。
試劑盒組成：
| 成分 | 規格 |
| 溶液A | 5ml |
| 溶液B | 50ml |
| 說明書 | 1份 |
儲存條件：低溫運輸、-20℃保存(但溶液B也可以常溫運輸和保存)，有效期一年。
使用方法：
下面操作是檢測細胞毒性的試驗，其他應用跟此類似或更簡單(如生長曲線試驗)，操作步驟可以以此為基礎稍作修改即可，故不再贅述。
㈠、接種細胞
1．按常規胰酶消化法消化匯合的單層細胞，收集到含血清的培養基中。
2．200g離心5分鐘收集細胞沉淀。
3．用培養基重懸細胞沉淀，制備成單細胞懸浮液并計數。
4．將細胞稀釋到2.5×103個/mL～5×10個/mL之間(需要根據細胞的生長速度決定)，如果不知道生長數度，一般可以稀釋到1×10個/mL。
5．將足夠量的細胞懸液轉移到培養皿中(便于用排槍取樣)。一個96孔板的MTT檢測需要約20mL的細胞懸液。
6．用排槍在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL細胞懸液(對正常細胞)。如果是腫瘤細胞，則加入100μL腫瘤細胞懸液和100μL培養基(總體積為200μL)。
注意：一定要把細胞加在孔的正中，否則細胞會聚集在孔的角落處，影響試驗。
7．用排槍在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟細胞懸液等體積的培養基。第1 列各孔將作為+培養基-細胞+MTT對照(用于測OD時調零)，第12列加培養基的作用是減少邊緣效應對第11列反應的影響。
8．按常規細胞培養方法在37℃和5% CO2條件下孵育1-3天，使細胞進入指數生長期。
㈡、藥物處理
9．用培養基將藥物稀釋到8個待測濃度(如果不知道待測濃度，則需要預試驗確定)，一般一種藥物需要做3塊平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培養基(不要觸動細胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培養基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鮮培養基，這些孔將作為+培養基+細胞-藥物的對照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8個濃度梯度的待測藥物，每列加入一個濃度的藥物。
13．按常規方法把96孔板繼續放在37℃和5% CO2條件下孵育一定的時間，此段時間即為藥物處理細胞的時間，由用戶自己決定。
14．處理結束后去除第2到第11列(共10列，均含細胞)所有孔中的培養基，并再加入100μL新鮮培養基。
15．每天換培養使細胞數量擴增2-3倍(所需時間隨細胞不同而不同)。
㈢、存活細胞計數
16．在生長末期，去除第1到第11列各孔中的培養基后，再加入100μL新鮮培養基和10μL溶液A(含MTT成分)，用錫箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2條件下繼續培養4-8小時。
注意：溶液A在低溫情況下會凝固，使用前請室溫放置或20-25℃水浴至全部溶解，搖勻后使用。MTT有致癌性，一定要帶手套操作。
17．小心吸棄孔內培養基(含溶液A)。由于培養基可能會影響光吸收，zuì好盡可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置搖床上低速振蕩10分鐘，使MTT形成的formazan結晶物充分溶解。
19．由于產物不穩定，故需要立即在酶聯免疫檢測儀上選擇490nm測定吸光度。
注意：用第1 列各孔(+培養基-細胞+MTT對照)調零。
20．計數同樣處理的各次重復的平均值。
21．以藥物濃度為橫軸，以吸光度為縱軸繪制曲線。由于各處理吸光度值差別很大，一般需將其轉化成生長抑制率(以不加藥物的第2和第11列各孔數據的平均數作為)，這樣便于計算出IC50，用于各種藥物處理效果的比較。
注意：如果測生長曲線，則以時間為橫軸。正常生長曲線一般呈現S型，具有促進作用的則斜率加大。
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