SY0388 小牛腸堿性磷酸酶
- 產(chǎn)品/服務(wù)：SY0388 小牛腸堿性磷酸酶
- 型 號(hào)：SY0388
- 品 牌：百奧萊博
- 單 價(jià)：面議
- 更新日期：2023-06-02
- 有效期至：長(zhǎng)期有效
- 瀏覽次數(shù)：955
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
北京百奧萊博供應(yīng)的小牛腸堿性磷酸酶用于科學(xué)研究，我公司專注于蛋白質(zhì)研究產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應(yīng)，為您提供的小牛腸堿性磷酸酶質(zhì)量可靠，批間差小，且價(jià)格公道，熱切盼望您選購(gòu)我們的產(chǎn)品。...
產(chǎn)品詳細(xì)介紹
特別提示：包括小牛腸堿性磷酸酶在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱：小牛腸堿性磷酸酶
英文名稱：Alkaline Phosphatase (30 U/μl), Calf Intestine (CIAP)
產(chǎn)品貨號(hào)：SY0388
產(chǎn)品規(guī)格：1000U
本品為小牛腸來(lái)源的堿性磷酸酶，可以降解幾乎所有磷酸單酯，但是該酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。Alkaline Phosphatase，中文名堿性磷酸酶，可將DNA、RNA的5’端磷酸基團(tuán)去除，常用于阻止載體的自連作用：在分子克隆實(shí)驗(yàn)中，DNA連接酶催化DNA連接時(shí)需要有磷酸基團(tuán)的存在，載體在經(jīng)酶切后會(huì)在切點(diǎn)端保留一個(gè)磷酸基團(tuán)。而載體經(jīng)堿性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端無(wú)磷酸基團(tuán)，因而不可以和自身3’ 端連接。因此連接反應(yīng)中載體本身會(huì)優(yōu)先發(fā)生的連接反應(yīng)被阻止，提高了目的片段插入率。另外，堿性磷酸酶還可制備用于5’端標(biāo)記的DNA模板，以及用于該酶蛋白的脫磷酸作用等。
來(lái)源：攜帶小牛腸堿性磷酸酶表達(dá)質(zhì)粒的酵母
質(zhì)量控制（Quality Control）：無(wú)核酸外切酶、核酸內(nèi)切酶、核糖核酸酶污染
熱滅活（Thermal Inactivation）：在螯合劑存在下，65℃加熱30min，99%活性不可逆喪失；使用苯酚，可使酶完全失活。
儲(chǔ)存液條件（Storage conditions）：10 mM Tris-HCl (pH8.0), 1 mM MgCl2, 50mM KCl, 0.1 mM ZnCl2, 50% glycerol.
活性定義：在pH9.8, 37℃條件下，以對(duì)硝基苯酚磷酸鹽(p-nitrophenylphosphate)為底物，1分鐘生成1μmol硝基酚(p-nitrophenol)所用的堿性磷酸酶量定義為1個(gè)活力單位。
zuì佳pH（Optimal pH）：該酶在底物濃度高的情況下其zuì佳反應(yīng)pH為10，在底物濃度低時(shí)，zuì佳pH為8，此時(shí)該酶活性較高濃度底物時(shí)稍低。
優(yōu)化體系（Optimal Buffer）：AP Buffer (500 mM Tris-HCl, pH9.0; 10 mM MgCl2)
儲(chǔ)存條件：-20℃
使用方法:
1 DNA去磷酸化
① 在1.5ml離心管中加入下列試劑：
無(wú)菌ddH2O————Up to 50μl
DNA 片段*————1-20pmol
Alkaline Phosphatase————1-2μl
10×AP buffer————5μl
【*】：?jiǎn)捂淒NA或含5’端突出末端的DNA推薦低溫下孵育，平末端DNA或含3’突出末端的DNA建議在較高溫度下孵育。
② 混勻上述試劑，于37℃或50℃孵育30min。或者37℃孵育15min后，再于50℃孵育15min。
2 酚氯f(wàn)ǎng法抽提DNA
① 苯酚/氯f(wàn)ǎng/異戊醇（25:24:1）抽提2次。
【注】：推薦在酚提取前將其在含5 mM EDTA, 0.5% SDS ,50 μg/ml Proteinase K的溶液中56℃孵育30min以徹底滅活堿性磷酸酶。在酚提取前于75℃孵育10min，滅活效果更佳。
② 氯f(wàn)ǎng/異戊醇（24:1）抽提。
3 乙醇沉淀DNA
① 加入2.5μl 3M NaCl(終濃度150mM).
② 加入125μl（2.5倍體積）預(yù)冷乙醇，混勻后于-20℃放置30-60min，沉淀DNA。
4 溶解DNA
離心，徹底去除乙醇后，將DNA溶于適量去離子水（＜20μl）。
根據(jù)您的關(guān)注的小牛腸堿性磷酸酶，您可能還對(duì)以下產(chǎn)品有需求：
名稱：過(guò)硫酸銨(APS)
貨號(hào)：YT625
規(guī)格：10g
本品用于配制PAGE膠等，通常先配制成10%的水溶液，然后再用于配制各種PAGE膠。10%過(guò)硫酸銨水溶液在室溫狀況下不太穩(wěn)定，4℃可以保存3-5天，-20℃可以保存1-2個(gè)月。
分子式：(NH4)2S2O8
分子量：228.20
純度：＞98%
儲(chǔ)存條件：室溫。
名稱：植物蛋白提取試劑盒
貨號(hào)：WE0264
規(guī)格：25次|100次
本試劑盒可從新鮮、冰凍或干燥植物組織中提取可溶性植物蛋白。適用于多種植物及植物的不同部位(如根、莖、葉、花、種子等)蛋白提取，提取植物蛋白，比傳統(tǒng)的方法提取蛋白產(chǎn)量大、活性高、速度快。所提蛋白可直接進(jìn)行蛋白電泳分析、免疫沉淀、Western Blot、蛋白活性測(cè)定及蛋白純化等實(shí)驗(yàn)。所提蛋白可用BCA蛋白定量試劑盒(貨號(hào)：WE0276)進(jìn)行濃度的測(cè)定。
試劑盒組成：
| 組份 | 25次 | 100次 |
| Plant Protein Extraction Reagent | 25ml | 100ml |
| Protease Inhibitor Cocktail | 250μl | 1ml |
保存條件：Protease Inhibitor Cocktail：-20℃，其它組分：室溫
注意事項(xiàng)：
1、本品含有1mM EDTA。
2、為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。
3、使用本產(chǎn)品提取蛋白后，可采用BCA法進(jìn)行蛋白定量。
4、為了獲得實(shí)驗(yàn)zuì佳效果，請(qǐng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)調(diào)整zuì佳使用量。
使用方法：
1、請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕鰧?shí)驗(yàn)所需Plant Protein Extraction Reagent進(jìn)行預(yù)冷。
2、稱量試驗(yàn)植物組織的重量。按照1 g組織加入5ml Plant Protein Extraction Reagent(在蛋白抽提前按照1:99比例加入Protease Inhibitor Cocktail)。
注意：
1)勻漿前將大塊的植物組織剪成小塊，機(jī)械勻漿器勻漿10 s，間歇10 s，反復(fù)三次進(jìn)行裂解，根據(jù)組織樣本不同選用適合的勻漿方式。
2)裂解液的使用量依據(jù)植物不同部位進(jìn)行調(diào)整，若需要濃縮的蛋白提取物，可適當(dāng)減少Plant Protein Extraction Reagent使用量。
3、勻漿后冰上孵育20-30分鐘。
4、4℃ ～13400×g，離心20分鐘。
5、收集上清中的可溶性蛋白，進(jìn)行下一步的純化或下游分析。
儲(chǔ)存條件：-20℃
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| 貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
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| QN1255 | 加拿大樹膠 | 100ml |
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