雙鏈DNA定量檢測試劑盒是高品質的核酸電泳和回收產品，由北京百奧萊博供應，本產品用于生化實驗研究等領域，我公司的雙鏈DNA定量檢測試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括雙鏈DNA定量檢測試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：雙鏈DNA定量檢測試劑盒
英文名稱：Picogreen dsDNA Assay Kit
產品貨號：SY0260
產品規格：100T|500T

Picogreen是一種為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測。歷來DNA濃度的測定在cDNA文庫的構建，DNA亞克隆、PCR產物的估測等領域中具有重要意義，疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測更是直接關系到人類的健康。

常用的檢測核酸的方法有:1）紫外吸光法（A260），該法操作簡便，但DNA樣品中核苷酸、單鏈DNA、RNA和蛋白質對紫外吸收信號影響很大，還容易受到核酸樣品中污染物的干擾，不能區分DNA和RNA，而且靈敏度低（ΔA260=0.1相當于5ug/ml的dsDNA）；2）探針雜交法，該法是傳統檢測微量DNA的常用方法，基本能滿足目前疫苗和治療性生物制品的檢測需求，但是該法耗時較長，操作繁瑣，穩定性、敏感性和特異性較差；3）Hoechst33258染料法，Hoechst33258是一種一定程度上特異于雙鏈DNA的核酸染料，基本不受蛋白質等污染物的干擾，可以檢測低至10ng/ml的DNA；在檢測穩定性和靈敏度上仍達不到理想效果。

Picogreen dsDNA定量法：Picogreen僅在與DNA雙鏈結合后才發出熒光，且所產生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個數量級范圍內呈線性，且幾乎無序列依賴性，可以地測量多個來源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴增產物。

相比傳統的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下：
①靈敏度高：數量級較UV吸光讀數更敏感，可節省寶貴的樣品；
②特異性強：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；
③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯fǎng、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴增產物而無需從反應混合物中純化DNA。
④易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數即可，且適用于96和384孔板；與大多數基于熒光的酶標儀和熒光計兼容。
⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領域。

若每次分析體積為2 mL，本試劑盒各組分試劑足夠200次分析使用，若使用微孔板或96孔板檢測，每次使用量200μl，則各組分試劑足夠2000次分析。

產品組份：

組分名稱	產品編號/規格	保存
dsDNA Quantitation Reagent	100μl×10	2～6℃避光干燥
2×TE buffer	50ml	2～6℃（短期）或-20℃（長期）
Calf thymus DNA standard (100μg/ml)	1ml	2～6℃（短期）或-20℃（長期）

注意事項

1）Picogreen定量試劑含有DMSO（已知有毒試劑），請小心操作；
2）盡管目前尚未有數據表明Picogreen具有誘變性和毒性，但是該試劑能結合雙鏈DNA，請操作時務必小心。

試劑準備
1）1×TE buffer 的配制：將2×TE 用無菌去離子水（不含Dnase）等體積稀釋至1×工作液。
2）PicoGreen工作液的配制：使用前將PicoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫；PicoGreen是以100μL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的（共10管）。實驗當天，根據實驗需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準備足夠的操作溶液以2ml檢測體系測定20個樣品，可向19.9mL1×TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA 定量試劑。
【注】：
a、由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。
b、PicoGreen 試劑見光易降解，所以應將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。
c、溶液zuì好在配制好數小時內使用，以保證zuì佳結果。

檢測步驟
1、 2μg/ml的Calf thymus DNA standard濃縮液的配制
用1×TE對Calf thymus DNA standard (100μg/ml)進行50倍稀釋，即向30μl Calf thymus DNA standard加入1.47ml 1×TE混勻即可。
2、 標準曲線的制備
① 比色皿體系檢測---（2ml）
a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE和2μg/ml Calf thymus DNA standard，隨后加入1ml PicoGreen定量試劑，混勻后，于室溫避光孵育2-5min，并以1×TE緩沖液為blank。
【注】：確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部，可以驅散氣泡。

TE (μl)	2μg/ml Calf thymus DNA standard (μl)	稀釋的PicoGreen定量試劑(μl)	Calf thymus DNA standard終濃度
0	1000	1000	1μg/ml
900	100	1000	100ng/ml
990	10	1000	10ng/ml
999	1	1000	1ng/ml
1000	0	1000	blank

表1 比色皿體系所需加入各組分量及標準品終濃度表

b、于熒光儀中檢測各濃度熒光值，Ex/Em=480nm/520nm。
【注】：為了確保熒光讀數在熒光儀的檢測范圍內，應調節增益使含zuì高DNA濃度的樣品熒光值與熒光儀的zuì大值一致；為了減少光漂白，應保持所有樣品的檢測時間一致。
c、各濃度得到的熒光值減去空白對照熒光值，對DNA濃度和熒光值做標準曲線。
② 微孔板體系檢測（200μl）
a、按照表2 向96孔板中加入TE和2μg/ml Calf thymus DNA standard，隨后加入100μl PicoGreen定量試劑，混勻后，于室溫避光孵育2-5min，并以1×TE緩沖液為blank。【注】：確信不要在樣品中引入氣泡，輕輕地彈微量檢測皿的外部，可以驅散氣泡。

TE (μl)	2μg/ml Calf thymus DNA standard (μl)	稀釋的PicoGreen定量試劑(μl)	Calf thymus DNA standard終濃度
0	100	100	1μg/ml
90	10	100	100ng/ml
99	1	100	10ng/ml
99.9	0.1	100	1ng/ml
100	0	100	blank

表1 酶標板體系所需加入各組分量及標準品終濃度表

b、于熒光酶標儀中檢測各濃度熒光值，Ex/Em=480nm/520nm。
【注】：為了確保熒光讀數在熒光儀的檢測范圍內，應調節增益使含zuì高DNA濃度的樣品熒光值與熒光儀的zuì大值一致；為了減少光漂白，應保持所有樣品的檢測時間一致。

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名稱：50×TAE電泳液
貨號：BTN100211
規格：250mL
TAE Buffer全名為Tris-acetate-EDTA buffer，它主要用于DNA的瓊脂糖電泳。跟TBE相比，它的特點是不含硼酸，不會影響連接等后續酶反應。此外含低鹽，所以可用于研究鹽對DNA電泳速度的影響。但其緩沖能力低于TBE，反復使用的次數少于TBE。線性雙鏈DNA的泳動速度快于TBE。

儲存條件：常溫運輸及保存、有效期一年。

名稱：SYBR Green Ⅱ核酸染料(10000×)
貨號：BTN140234
規格：100μL
SYBR Green II染料是一種高敏感的核酸染色試劑，可以對RNA或者是單鏈的DNA進行染色。不傳統的EB等染料相比，SYBR Green II染料具有靈敏度更高，低毒安全，可用于雜交前RNA質量的檢測而不影響的轉膜等顯著優點。

產品特點：
1. 靈敏度高，信噪比高，樣品熒光信號強，背景信號低。可檢測出100pg RNA或者單鏈DNA。不EB相比，SRBR Green II -RNA 復合物所激發的熒光是EB-RNA 復合物激發熒光的7倍。在變性瓊脂糖/尿素膠等條件下，SYBR Green II的靈敏度但仍高于EB，使用300nm 透射光顯影，非變性凝膠中檢測核酸的靈敏度可以達到5×10-7克。
2. 操作簡單，無須脫色或沖洗。使用方便，丌影響其它修飾酶作用。完全可以代替銀染，同時還兊服了銀染實驗過程復雜、操作繁瑣、費時的缺點。
3. SYBR Green II 丌是特異性的結合RNA或者DNA 單鏈，其對單鏈的結合效率是雙鏈的約2倍。不其他大部分核酸染料丌同，SYBR Green II 不RNA 結合的熒光量子產率和熒光范圍高于不DNA 結合。
4.熒光范圍廣，可使用多種成像設備觀測。zuì大激發波長在497nm處，次激發波長在245nm 附近。發射波長在520nm處產生。
5.適用范圍廣，可適用于多種電泳分析、DGGE和SSCP 及RNA 質量分析實驗。

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
SYBR Green II染料檢測核酸時即可用于預染也可電泳后染色。

1.預染實驗
 取1μL 貯存液加入1ml TE緩沖液或者滅菌雙蒸水中混勻，再加入1ml的6×loading buffer上樣緩沖液混勻(此時溶液為1：2000 稀釋，即為工作液)電泳時取1-2ul工作液和5ul電泳樣品混勻后直接上樣。
2.電泳后染色
a.電泳后，在室溫、避光的情況之下準備染色液。染色液要在塑料器皿中制備而丌要在玻璃器皿中，因為玻璃表層對該試劑有吸附作用。
b.染料取出后室溫放置，恢復室溫后簡單離心混勻。
c.染色液使用1×TBE緩沖液進行1：10，000 稀釋。如果是瓊脂糖甲醛變性膠，用1×TBE做1：5000的稀釋。由于SYBR Green II RNA染色液靈敏度高，所以要選用新鮮的1×TBE緩沖液進行稀釋，以克緩沖液中殘存的雜質產生背景，影響實驗結果。注意：為提高染色的靈敏度，需要保證緩沖液的PH 值7.5-8 之間。
d. 把膠放在塑料的染色容器中，加入足夠染色液使之覆蓋整塊膠。用鋁箔遮蓋或者是放在暗處避光。在染色之前沒有必要先將膠中的變性劑如尿素和甲醛洗出來，因為本產品復合物發出的熒光在甲醛或者尿素存在時丌會猝滅。
e.在室溫下輕輕搖晃凝膠。聚丙烯酰胺凝膠的zuì佳染色時間是10-40分鐘，瓊脂糖凝膠的zuì佳染色時間是20-40分鐘。染色時間也可能隨著凝膠的厚度和濃度變化。由于其熒光本底很低，凝膠染色后無需脫色。染色工作放在2-8℃ 避光保存，可以重復使用3-4次。
 注意：SYBR Green II RNA染色液丌影響RNA 向膜上的轉移和northern中的后續實驗。
3.染色膠顯色和成像
 本產品所激發的熒光可以使用300nm和254nm光波照射，通過Wratten 15濾光片檢測。注意：由于熒光本底較低，所以可以通過適當延長曝光時間的方法檢測痕量的核酸。

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